Dans les pays industrialisés, on estime qu’un couple sur six consulte pour des problèmes de fertilité. L’état actuel des connaissances chez l’animal permet d’envisager le développement de techniques de thérapie cellulaire utilisant les cellules souches germinales (CSG), qui assurent le maintien de la spermatogenèse dans le testicule, dans le but de restaurer une fertilité après transplantation testiculaire. Notre projet vise à caractériser les CSG humaines.

Des suspensions cellulaires préparées à partir de biopsies testiculaires humaines ont été analysées par cytométrie en flux à l’aide du fluorochrome spécifique de l’ADN Vybrant pour le marqueur side population (SP) et des marqueurs α6 intégrine, Thy-1, et β-2 microglobuline. Pour l’étude fonctionnelle des CSG humaines, nous avons développé un test in vivo après transplantation des cellules dans les testicules de souris immunodéficientes ‹‹ humanisées ›› NSG, permettant d’observer un début de colonisation des tubules séminifères murins par les CSG humaines.

Ces marqueurs permettent de définir différentes sous-populations germinales, dont une sous-population SPα6+Thy-1+β2M qui contient les progéniteurs spermatogoniaux les plus immatures. Le test de fonctionnalité après transplantation montre que les CSG sont présentes dans la sous-population cellulaire SPα6+Thy-1+β2M⁻. D’autre part, différentes conditions de culture in vitro ont été testées et permettent la culture des cellules souches ‹‹ spermatogonies immatures ›› sur une période de 21jours.

Nous avons ainsi développé une méthode permettant d’étudier la différenciation germinale au cours de la spermatogenèse adulte humaine, et de purifier une population hautement enrichie en GSG.