Plus de 50 % des mélanomes présentent une mutation du gène BRAF ou NRAS. Les inhibiteurs de BRAF ont permis d’améliorer la survie globale des patients traités pour un mélanome métastatique. La détection de ces mutations repose sur des techniques de séquençage de l’ADN. Les objectifs de ce travail sont d’évaluer la faisabilité et les performances analytiques du système Biocartis Idylla™ (processus automatisé couplant l’extraction, le séquençage et l’analyse de l’ADN), pour la caractérisation des mutations BRAF et NRAS tissulaire et plasmatique chez des patients atteints de mélanome en phase métastatique.

Le statut mutationnel a été étudié chez 20 patients (10 patients mutés BRAF, 5 patients mutés NRAS, 5 patients non mutés) suivis pour un mélanome métastatique, à la fois sur coupe tissulaire (copeaux de paraffine) et sur l’ADN plasmatique avant et après traitement (ciblé ou systémique). Les analyses ont été réalisées avec les kits tissu Idylla™ BRAF Mutation Test (CE-IVD) ; BRAF-NRAS-EGFR Mutation Assay (RUO) et plasma ctBRAF ; ctNRAS Mutation Assay (RUO). Les résultats ont été comparés aux deux techniques de référence accréditées ISO 15189 et réalisées dans le laboratoire : le pyroséquençage (kits CE-IVD - Therascreen BRAF et NRAS Qiagen, Hilden, Germany) et l’immunohistochimie BRAFV600E (clone VE1, Ventana, Tucson, AZ).

Le génotypage par le système Idylla est simple d’utilisation et rapide (environ 90min). Les résultats de l’analyse tissulaire BRAF et NRAS sont concordants avec le pyroséquençage [85 % (k=0,69) et 93 % (k=0,81) respectivement] et l’immunohistochimie BRAFV600E [77 % (k=0,49)]. L’analyse plasmatique montre qu’une mutation de BRAF ou de NRAS était détectable chez 80 % (13/15) des patients avant traitement et 13 % (2/15) patients après traitement. Ces deux derniers patients sont en progression selon les critères Recist. La mutation était donc indétectable après traitement chez 13/15 patients, ce qui semble être associé à une bonne réponse thérapeutique initiale (p=0,09).

Certains résultats discordants sur l’analyse tissulaire sont en cours de vérification (par analyse par PCR digitale) et pourraient être liés à une plus grande sensibilité de la technique Idylla permettant de détecter jusqu’à 1 % d’allèle muté versus 5 % pour le pyroséquençage.

La technique Idylla™ est très spécifique et très sensible pour la détection des mutations sur les gènes BRAF et NRAS sur tissu et ADN plasmatique et est une bonne alternative aux méthodes conventionnelles de séquençage. L’analyse « en-temps réel » et la facilité de mise en œuvre technique en font un système compatible avec une utilisation « en routine » pour le suivi et le monitoring de la maladie résiduelle des patients atteints de mélanomes métastatiques après traitement.