Évaluation d’une méthode de criblage large dans le plasma avec extraction en ligne des échantillons couplée à une détection par spectrométrie de masse haute résolution type OrbiTrap - 22/04/17
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Résumé |
Objectif |
Mettre en place et évaluer une méthode de criblage large par spectrométrie de masse haute résolution et extraction en ligne des échantillons, utilisable en routine dans un laboratoire de toxicologie d’urgence.
Méthodes |
La méthode analytique utilise un Orbitrap QExactive Focus® avec extraction Turboflow®. La partie LC-MS-HR a été décrite par Helfer [1 ]. Les échantillons ont été préparés par précipitation avec de l’acétonitrile contenant 6 étalons internes deutérés. L’extraction se fait grâce à deux colonnes Turboflow en série, une cyclone 50×0,5mm et une Phenyl 50×0,5mm. La séparation est réalisée sur une colonne Accucore Phenyl-hexyl 100×2,1mm, 2,6μm. Après 17min d’analyse, l’exploitation des données se fait via le logiciel TraceFinder®. Au total, 150 molécules d’intérêt (médicaments et stupéfiants) les plus fréquemment identifiés au laboratoire ont été choisies et réparties en 30 groupes de 4 à 8 composés pour la réalisation de gammes. Les gammes ont été faites à partir de solutions d’étalonnage dans le plasma dont les concentrations ont été définies en fonction des concentrations thérapeutiques et toxiques des différents composés. Les solutions d’étalonnage ont été analysées sur trois jours différents non consécutifs. Des contrôles de qualité fournis par Chromsystems ou préparés par surcharge d’un plasma avec les molécules d’intérêt ont été analysés.
Résultats |
Pour les 150 molécules sélectionnées, des limites d’identification (LOI) et de quantification (LOQ) ont été obtenues. La LOI a été établie comme la valeur de concentration la plus faible permettant une confirmation de la présence d’une molécule basée sur la masse de son ion parent avec une précision de 5ppm, le temps de rétention, deux fragments majoritaires, un profil isotopique proche et une comparaison de spectres suffisante. La LOQ a été obtenue comme la plus faible concentration permettant d’obtenir un biais inférieur à 20 % et un pourcentage d’écart-type inférieur lui aussi à 20 % pour les trois gammes obtenues. La précision intra-jour (n=8) réalisée à ce jour pour 15 composés est acceptable avec des CV<10 %. Les résultats sont présentés dans le Tableau 1.
Conclusions |
Ce travail présente les résultats de la validation d’une méthode de criblage pour 150 molécules, pour lesquelles des valeurs de LOI et de LOQs ont été déterminées. Les gammes ainsi générées ont été sauvegardées et seront utilisées pour estimer la concentration des molécules présentes dans les échantillons.
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Vol 29 - N° 2S
P. S53-S54 - mai 2017 Retour au numéroBienvenue sur EM-consulte, la référence des professionnels de santé.
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