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Validated spectrophotometric and chromatographic methods for analysis of the recently approved hepatitis C antiviral combination ledipasvir and sofosbuvir - 24/08/17

Méthodes spectrophotométriques et chromatographiques validées pour l’analyse de la combinaison antivirale de l’hépatite C récemment approuvée, le ledipasvir et le sofosbuvir

Doi : 10.1016/j.pharma.2017.07.005 
M.M. Baker a, D.S. El-Kafrawy b, M.S. Mahrous b, T.S. Belal c,
a Methodology Department, Pharco Pharmaceuticals Company, Alexandria, Egypt 
b Pharmaceutical Chemistry Department, Faculty of Pharmacy, University of Alexandria, Elmessalah 21521, Alexandria, Egypt 
c Pharmaceutical Analytical Chemistry Department, Faculty of Pharmacy, University of Alexandria, Elmessalah 21521, Alexandria, Egypt 

Corresponding author.
Sous presse. Épreuves corrigées par l'auteur. Disponible en ligne depuis le Thursday 24 August 2017
Cet article a été publié dans un numéro de la revue, cliquez ici pour y accéder

Summary

This work describes five simple and reliable spectrophotometric and chromatographic methods for analysis of hepatitis C antiviral binary mixture of ledipasvir (LPV) and sofosbuvir (SBV). Method I is based on the use of Amax and derivative spectrophotometry with the zero-crossing technique where LPV was determined using its Amax and 1D amplitudes at 324 and 338nm respectively, while SBV was determined by measuring the 1D amplitudes at 276nm. Method II involves the application of the ratio spectra derivative spectrophotometry. For LPV, 12μg/mL SBV was used as divisor and the 1DD amplitudes at 239.8nm were plotted against LPV concentrations; while by using 10μg/mL LPV, the amplitudes at 279.2nm were found proportional to SBV concentrations. Method III depends on ratio-difference measurement where the peak to trough amplitudes between 229.2 and 268.4nm were measured and correlated to LPV concentration. Similarly, the amplitudes between 268.6 and 229.2nm in the SBV ratio spectra were recorded. For method IV, the two compounds were separated using HPTLC sheets of silica gel and a mobile phase composed of chloroform-methanol (94:6) followed by densitometric measurement of LPV and SBV spots at 331 and 267nm respectively. Method V depends on HPLC-DAD. Effective chromatographic separation was achieved using Thermohypersil C8 column (4.6×250mm, 5μm) with a mobile phase consisting of 0.01M sodium dihydrogen phosphate (pH 2.5) and methanol (20:80) at a flow rate 1.2mL/min and detection at 332 and 262nm for LPV and SBV respectively. Analytical performance of the developed methods was validated according to the ICH guidelines with respect to linearity, ranges, precision, accuracy, detection and quantification limits. The validated methods were successfully applied to the simultaneous analysis of LPV and SBV in mixtures of different proportions and their combined tablet dosage form.

Le texte complet de cet article est disponible en PDF.

Résumé

Ce travail décrit cinq méthodes spectrophotométrique et chromatographique simples et fiables pour l’analyse de hépatite C antiviral mélange binaire de ledipasvir (LPV) et sofosbuvir (SBV). La méthode I est basée sur l’utilisation de Amax et de la spectrophotométrie dérivée avec la technique de passage à zéro dans lesquels LPV était déterminé en utilisant les amplitudes Amax et en dérivé première (1D) à 324nm et 338 respectivement, tandis que SBV a été déterminé en mesurant les amplitudes 1D à 276 nm. La méthode II implique l’application du rapport des spectres en spectrophotométrie dérivée. Pour LPV, 12μg/mL de SBV ont été utilisés comme diviseur et les amplitudes en dérivé seconde (1DD) à 239,8 nm ont été tracées en fonction des concentrations de LPV ; tandis qu’en utilisant 10μg/mL LPV comme diviseur, les amplitudes 1DD à 279,2nm ont été trouvées proportionnelle aux concentrations de SBV. La méthode III dépend sur la mésure des ratio de différence d’amplitudes entre le maximum et le minimum entre 229,2 et 268,4nm qui ont été mesurés et corrélés à la concentration de LPV. De même, les amplitudes entre 268,6 et 229,2nm dans le rapport des spectres du SBV ont été enregistrés. Pour la méthode IV, les deux composés ont été séparés en utilisant des plaques Merck HPTLC de gel de silice 60 F254 et une phase mobile composée de chloroforme/méthanol (94:6) suivie d’une mesure densitométrique des spots de LPV et SBV à 331 et 267nm respectivement. La méthode V a utilisé l’HPLC-DAD (barrette de diode). Une séparation chromatographique efficace a été obtenue en utilisant une colonne thermohypersil C8 (4,6×250mm, 5μm) avec une phase mobile consistant de 0,01M dihydrogénophosphate de sodium (pH 2,5) et méthanol (20:80) à un débit de 1,2mL/min et une détection à 332 et 262nm pour LPV et SBV respectivement. Les performances analytiques des méthodes développées ont été statistiquement validées selon les directives de l’ICH en matière de limites de linéarité, de précision, d’exactitude, de limités de détection et de quantification. Ces méthodes spectrophotométriques et chromatographiques validées ont été appliquées avec succès à l’analyse simultanée de LPV et SBV dans des mélanges synthétiques en différentes proportions et dans leur forme de dosage de comprimés combinés.

Le texte complet de cet article est disponible en PDF.

Keywords : Ledipasvir, Sofosbuvir, Derivative spectrophotometry, Ratio spectra, HPTLC, HPLC-DAD

Mots clés : Ledipasvir, Sofosbuvir, Spectrophotométrie dérivée, Spectres ratio, HPTLC, HPLC-DAD


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