L’hypoxie augmente la production de citrulline par les entérocytes humains : étude in vitro - 06/09/17
, M. Couchet 2, C. Breuillard 2, F. Lamarche 2, C. Corne 3, É. Fontaine 2, 4, C. Moinard 2Résumé |
Introduction et but de l’étude |
Il est maintenant bien établi que la citrulline (CIT) plasmatique est un excellent marqueur de la fonctionnalité intestinale, en particulier chez les patients de réanimation où elle est généralement effondrée [1]. Or, les mécanismes impliqués ne sont pas connus. Nous proposons que l’hypoxie et l’inflammation observées dans ces situations pourraient impacter négativement la production de CIT. L’objectif de cette étude est donc de déterminer, in vitro, si l’hypoxie et l’inflammation ont des effets sur la production de CIT par l’ornithine transcarbamylase (OTC). Ces effets ont été évalués en utilisant un modèle d’incubation d’explant duodénal humain [2]. Le protocole a été approuvé par le comité de protection des personnes du CHU de Grenoble.
Matériel et méthodes |
Huit biopsies duodénales ont été prélevées chez des sujets après information et obtention d’un consentement écrit. Les biopsies ont été incubées dans du milieu de culture complet pendant un temps court (6h) ou long (18h) selon quatre conditions : témoin, inflammation (mélange de cytokines : IL-1β, 1μg/L ; TNFα, 20μg/L ; IFNγ, 10μg/L), hypoxie (3 % d’O2) et inflammation avec hypoxie. Après mesure de la viabilité cellulaire, les taux de CIT libérée dans le milieu de culture pendant l’incubation ont été dosés par chromatographie d’échange d’ions. Le niveau d’activité de l’OTC a été mesuré par dosage enzymatique et l’expression protéique de cette enzyme par western blot.
Résultats |
Les pourcentages de mort cellulaire à l’issue de la période d’incubation ne différaient pas quelles que soient les conditions (Tableau 1). La production intestinale de citrulline était augmentée dans les conditions hypoxie et hypoxie avec inflammation après 6h d’incubation. Ces différences avaient disparu après 18h d’incubation. Cependant, cette augmentation de production de citrulline à 6h ne s’accompagnait ni d’une modification de l’activité ni d’une modification de la quantité de protéine de l’OTC.
Conclusion |
La production de citrulline par les entérocytes apparaît augmentée en condition d’hypoxie avec ou sans inflammation sans que cela ne soit expliqué par une modification de l’activité enzymatique ou de l’expression protéique de l’OTC. Les mécanismes précis restent à déterminer.
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Vol 31 - N° 3
P. 221 - septembre 2017 Retour au numéro
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