La PCR en temps réel : principe et application en infectiologie

Objectifs. La réaction de polymérisation en chaîne en temps réel, ou quantitative, représente une méthode rapide, sensible et spécifique pour la mise en évidence d’agents pathogènes.

Méthodes. La fluorescence est utilisée pour mesurer l’accumulation des produits de la réaction de polymérisation en chaîne après chacun de ses cycles. Les mesures de fluorescence permettent d’extrapoler la quantité d’ADN cible présent dans l’échantillon avant l’amplification ; la détection et la quantification sont ainsi obtenues dans un même test. Les limites de détection sont habituellement de l’ordre du femtogramme pour de l’ADN purifié d’agent pathogène et du picogramme pour de l’ADN d’agent pathogène dans un échantillon.

Applications. La réaction de polymérisation en chaîne en temps réel est déjà considérée comme un outil valable pour les études d’épidémiologie moléculaire, la détection d’agents pathogènes émergents et la mise en évidence de résistances aux antibiotiques. Dans cette revue, nous décrivons quatre des principales techniques utilisées pour la détection et la quantification en temps réel. Nous abordons aussi les applications actuelles de la réaction de polymérisation en chaîne en temps réel pour la détection de divers agents pathogènes et les points à considérer pour le développement de nouveaux tests.

Objectives. Real time PCR or quantitative reaction constitutes a rapid, sensitive and specific method for the detection of infective agents.

Methods. Fluorescence is used to measure the accumulation of products of polymerase chain after each cycle. Measurement of fluorescence allows for direct quantification of target DNA present in the sample. Detection and quantification are determined simultaneously. Limits of detection are usually about a femtogram for purified DNA from pathogenic agents, and about a picogram for DNA from samples containing pathogens.

Applications. Real time PCR method is already seen as a tool applicable to molecular epidemiology, for detection of emerging pathogens and for antibiotic resistance detection. The objectives of this review include four principal techniques used for real time detection and quantification, with current application of real time PCR for the detection of various pathogens and the development of new tests.