Introduction et But de l’étude. – La compréhension des mécanismes moléculaires de l’absorption intestinale du cholestérol reste un élément déterminant dans le but de réduire son apport nutritionnel. Nous avons choisi de suivre les mécanismes de ce phénomène dans l’intestin murin prélevé au cour de la digestion lipidique.

Matériel et Méthodes. – Des souris mâles C57/bl6 à jeun, ont reçu un gavage lipidique avec 200 µl de 1 % cholestérol dans de l’huile de maïs puis ont été sacrifiées à différents temps de digestion. Leurs duodénums ont été prélevés pour analyse des niveaux d’expression transcriptionnelle et pour l’immuno-localisation de certains transporteurs du cholestérol. Les gouttelettes lipidiques ont été identifiées sur coupes en congélation par coloration à l’Oil red O. Ces gouttelettes ont été isolées par centrifugations différentielles puis analysées par Western-blot.

Résultats. – À 1 h ou 4 h près gavage lipidique des souris, nous observons dans le duodénum murin, une augmentation des ARN messagers de certains transporteurs impliqués dans l’absorption proprement-dite du cholestérol (NPC1L1 ou Neimann Pick type C like 1 protein) ainsi que des transporteurs ABC (ATP Binding Cassette) impliqués dans le rétro efflux du cholestérol dans la lumière intestinale (l’hétérodimère ABCG5 et ABCG8) ou dans sa sécrétion au pôle basal des entérocytes (ABCA1). Au contraire, l’expression de SR-BI ou scavenger receptor BI reste inchangée. Par immuno-histochimie, nous montrons que SR-BI, NPC1L1, ABCG5, ABCG8 et les apolipoprotéines A1 et B sont principalement localisées au niveau de la membrane apicale. Au temps 4 heures après gavage lipidique, NPC1L1 et les apolipoprotéines A1 et B montrent une relocalisation intracellulaire, plus concentrée vers le pôle basal des entérocytes. Ces deux dernières protéines, marqueurs des chylomicrons et/ou des HDL, sont aussi présentes dans la lamina propria, témoignant de la sécrétion des lipoprotéines lors de la digestion.

Sur coupes de duodénum en congélation et à l’aide du colorant des lipides neutres « Oil red O », nous avons observé que la digestion lipidique s’accompagne de la formation de nombreuses gouttelettes lipidiques envahissant les entérocytes puis la lamina propria.

Les gouttelettes lipidiques présentes à 4 h après digestion lipidique ont été isolées selon leur taille ou leur densité, par flottaison, lors de centrifugations différentielles : 20 minutes à 20 000xg (isolement des chylomicrons), 1 heure à 100 000 xg (gouttelettes de taille inférieure) ou 16 h à 142 000xg à une densité de 1,21 (permettant d’isoler les HDL). Par Western-blot, nous avons identifié dans ces fractions la présence des apolipoprotéines B ou A1, celle de l’ADRP, un marqueur des gouttelettes intra-cytoplasmiques, mais aussi des transporteurs SR-BI et ABCG5 et ABCG8, suggérant une relocalisation active de ces protéines pendant la digestion lipidique.

Conclusions. – La digestion lipidique s’accompagne, in vivo, de la formation de gouttelettes lipidiques ainsi que de la relocalisation de certains transporteurs du cholestérol sur ces structures de transport.