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O56 Mécanismes de sécrétion des vésicules de type synaptique dans les cellules pancréatiques - 21/12/10

Doi : 10.1016/S1262-3636(10)70060-4 
A. Bergeron, P. Bezzi, R. Regazzi
Département de Biologie Cellulaire et de Morphologie, Université de Lausanne, Lausanne, Suisse 

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Résumé

Introduction

Les cellules β sécrètent de l’insuline transportée dans des vésicules larges à cœur dense, les granules de sécrétion. L’insuline est libérée par exocytose en réponse à des sécrétagogues. Les cellules β possèdent un second type de vésicules sécrétoires. Ces organelles, appelés microvésicules de type synaptique, contiennent du GABA et d’autres neurotransmetteurs. La libération de ces neurotransmetteurs pourrait participer à la communication paracrine des cellules des îlots de Langerhans, contribuant ainsi à la coordination des fonctions endocrines du pancréas. Cependant, le mécanisme précis de sécrétion des vésicules de type synaptique des cellules β reste à élucider.

Matériels et Méthodes

La caractérisation de la machinerie d’exocytose des microvésicules des cellules β de souris (MIN6B1) est réalisée par immunocytochimie et par fractionnement subcellulaire en gradient de sucrose suivi de Western blots. Les cellules MIN6B1 sont transfectées avec la protéine synaptophysine fusionnée à une GFP sensible au pH, la pHluorine. Les cellules sont ensuite analysées au microscope de fluorescence par réflexion interne totale (TIRFM).

Résultats

Nous avons mis en place une technique d’imagerie pour étudier la sécrétion des microvésicules. Notre approche repose sur le fait que dans les cellules β, la synaptophysine est spécifiquement localisée sur ces vésicules. La pHluorine, fusionnée à la synaptophysine, est située du côté intra-vésiculaire, où le pH est acide. L’émission de fluorescence de la construction est ainsi faible. Lorsque la vésicule fusionne avec la membrane plasmique, la construction est exposée à un pH neutre, ce qui entraîne une augmentation de la fluorescence. Cela permet la visualisation en temps réel de fusions de vésicules individuelles. Nous avons pu montrer que le glucose et d’autres sécrétagogues stimulent l’exocytose des microvésicules. Deux types d’événements de fusion sont observables : des fusions transitoires de type « kiss-and-run » et des fusions complètes. Actuellement, nous testons l’effet de toxines qui ciblent la machinerie d’exocytose sur le nombre total et le type de fusion.

Conclusion

La technique d’imagerie que nous avons développé nous permettra d’élucider les mécanismes qui contrôlent la sécrétion des microvésicules des cellules β.

Le texte complet de cet article est disponible en PDF.

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Vol 36 - N° S1

P. A15 - mars 2010 Retour au numéro
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