P248 Étude des microparticules libérées par les cellules RIN-m5F soumises à différentes conditions de stress - 21/12/10
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Résumé |
Introduction |
La greffe d’îlots pancréatiques se heurte à l’absence de marqueur de suivi de la masse β insulaire greffée. Les microparticules (MPs) sont des fragments de membrane plasmique émises par les cellules soumises à une agression. L’objectif de ce travail est de doser les MPs libérées par les cellules RIN-m5F soumises à différents stress et d’évaluer leur fonction et viabilité.
Matériels et Méthodes |
Les cellules RIN-m5F d’insulinôme de rat sont soumises en culture à trois stress : un stress oxydant (H2O2), inflammatoire (cytokines) et pharmacologique (Streptozotocine, STZ) en milieu glucosé à 2 g/L et 4,5 g/L. Les MPs libérées et insolubilisées après capture sur Annexine V sont quantifiées grâce à leur contenu en phosphatidylsérine (PhtdSer) par test enzymatique. La réponse cellulaire est évaluée au plan de l’apoptose, la libération d’insuline (ELISA) et par l’étude des transporteurs de glucose.
Résultats |
En présence d’H202 (40 μM), l’apoptose induite quadruple après 8 heures pour retourner aux valeurs basales après 24 heures alors que les taux de MPs augmentent de 15 à 60 nM Eq. PhtdSer/106 cellules à 8 h L’apoptose induite par la STZ (10 mM) est maximale dès la 2e heure et s’accompagne d’une élévation modeste de MPs de 20 à 30 nM Eq. PhtdSer/106 cellules en milieu normoglucosé atteignant 140 nM Eq. PhtdSer/106 cellules en milieu hyperglucosé. L’incubation des cellules en présence de trois cytokines (IL1β, TNF⍺, INFγ) entraîne un triplement de l’apoptose induite, alors que le taux de MPs passe de 32 à 110 nM Eq. PhtdSet/106 cellules. Un immunomarquage de GLUT 2 est observé sur les cellules stressées par H202, alors qu’en présence de STZ le marquage GLUT 4 est prédominant. Seul le traitement par STZ a permis d’identifier des MPs porteuses de GLUT4. Leur contribution est de 1,2 nM Eq. PhtdSer et double en milieu hyperglucosé (3,2 nM Eq. PhtdSer).
Conclusion |
Cette étude montre une génération accrue de MPs par des cellules soumises à différentes conditions de stress. Ces données suggèrent l’intérêt des MPs pour le suivi de la perte cellulaire au cours de la greffe d’îlots pancréatiques.
Le texte complet de cet article est disponible en PDF.
Vol 36 - N° S1
P. A97 - mars 2010 Retour au numéro
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