La période néonatale est caractérisée par un hypoaldostéronisme fonctionnel accompagné d’une déshydratation et d’une perte en sel plus ou moins sévères. Ce phénomène est aggravé chez les prématurés qui présentent un défaut de sécrétion d’aldostérone et de cortisol à la naissance. Afin d’étudier le mécanisme de ce déficit, nous avons établi les profils stéroïdomiques de 152 nouveau-nés (cohorte PREMALDO) par LC-MS/MS à partir de sang de cordon (J0) et de sang périphérique (J3). Les nouveau-nés étaient répartis en trois groupes : <33 semaines d’aménorrhée (SA), groupe 1 (n=46), 33–37 SA, groupe 2 (n=67), >37 SA (n=39). Pour chaque étape de biosynthèse, l’index de l’activité enzymatique (IAE) est estimé par le rapport des concentrations [produit]/[substrat]. À la naissance, les concentrations des précurseurs minéralocorticoïdes et de l’aldostérone sont significativement plus faibles chez le grand prématuré (376±136 vs 721±404pg/mL, groupes 1 et 3 respectivement, moyenne±ET). De même, les concentrations de cortisol (F, 16,3±21,2 vs 46,9±28,8ng/mL) et de ses précurseurs 11-désoxycortisol (S) et 17-hydroxyprogestérone (17-OH-P) sont diminuées. L’IAE_CYP11B1 (F/S) est plus faible chez le grand prématuré alors que IAE_CYP21A2 et IAE_CYP11B2 ne sont pas altérés. À J3, cette baisse de IAE_CYP11B1 persiste et s’accompagne de l’accumulation des précurseurs en amont du CYP11B1 (17-OH-P, S, et 11-désoxycorticostérone). En conclusion, nos résultats suggèrent que le défaut de sécrétion de cortisol chez le grand prématuré est la conséquence d’un déficit partiel en CYP11B1. L’altération de sécrétion d’aldostérone néonatale se normalise après trois jours de vie, selon un mécanisme qui reste à élucider.