Introduction. L'apoptose joue un rôle important dans la perte cellulaire endothéliale (CE) observée pendant la conservation des greffons cornéens en organoculture. La staurosporine est un inhibiteur non spécifique de protéines kinases qui induit l'apoptose de nombreux types cellulaires. Nous avons étudié le déroulement de la mort des cellules endothéliales cornéennes induite par la staurosporine afin d'en comprendre les mécanismes intra cellulaires.

Méthodes. Les cellules endothéliales cornéennes humaines immortalisées ont été étudiées trois, six, douze et 24 heures après incubation avec de la staurosporine à 0.2 mM. Le pourcentage de desquamation à été mesuré. Un test de cytotoxicité mesurait le taux de lacticodéshydrogénase relargué. Les modifications apoptotiques des noyaux étaient détectées par coloration chromatinienne au Hoechst 33342. La présence de formes activées de Caspases 3 et 9 était recherchée par immunohistochimie et confirmée par Western Blot et mesure d'activité enzymatique par méthode fluorimétrique. Les modifications morphologiques étaient étudiées en microscopie électronique à transmission (MET)

Résultats. La nature apoptotique de la mort des CE induite pas staurosporine a été confirmée par la MET. La desquamation et la condensation chromatinienne augmentaient de façon temps dépendant. Des activités Caspase 3 et 9 étaient mises en évidence dès la troisième heure d'incubation en présence de staurosporine.

Discussion. Ces données suggèrent fortement le rôle de l'apoptose dans la mort de CE induite par la staurosporine. L'activation de caspases semble être un phénomène précoce. La conséquence principale de cette apoptose est une desquamation rapide des CE de leur support, comme il est couramment observé lors de la mort cellulaire au cours de l'organoculture en particulier dans les plis cornéens.

Conclusion. L'apoptose de la cellule endothéliale cornéenne humaine induite in vitro par staurosporine constitue un modèle utile à l'étude de stratégies d'inhibition de la mort cellulaire.