Le lymphome de Hodgkin classique (LHc) présente une histologie particulière caractérisée par peu de cellules tumorales CD30+ [1Mathas S., Hartmann S., Küppers R. Hodgkin lymphoma: pathology and biology Semin Hematol 2016 ;  53 : 139-147 [cross-ref]

Cliquez ici pour aller à la section Références]. Le LHc exploite la voie PD1/PDL1 via une altération du nombre de copie du gène CD274/PDL1 (9p24,1) codant pour PDL1 et représente donc un excellent candidat aux thérapies anti-PD1 [2Yamamoto R., et al. PD-1 ligand interaction contributes to immunosuppressive microenvironment of Hodgkin lymphoma Blood 2008 ;  111 : 3220-3224 [cross-ref]

Cliquez ici pour aller à la section Références, 3Ansell S.M., et al. PD-1 blockade with Nivolumab in relapsed or refractory Hodgkin's lymphoma N Engl J Med 2015 ;

Cliquez ici pour aller à la section Références]. L’amplification CD274/PDL1 pourrait avoir un rôle pronostique [4Roemer M.G.M., et al. PD-L1 and PD-L2 genetic alterations define classical Hodgkin lymphoma and predict outcome J Clin Oncol 2016 ;

Cliquez ici pour aller à la section Références]. L’objectif est de développer une technique d’immunofluorescence-FISH combinée CD30/PDL1 pour repérer les cellules tumorales et ainsi améliorer la détection des anomalies cytogénétiques de CD274/PDL1.

L’immunofluorescence-FISH est réalisée sur prélèvements fixés en formol et inclus en paraffine. Après déparaffinage, le démasquage antigénique est réalisé dans un tampon pH6 à 99°C. L’anticorps primaire et l’anticorps secondaire fluorescent rouge sont incubés séquentiellement pendant 1h. La sonde « maison » PDL1 est ensuite appliquée. Le lavage post-hybridation est réalisé dans du PBS/0,1 % Tween20. Deux cas sont analysés et 50 cellules tumorales sont comptées à l’aide d’un microscope à épifluorescence.

On observe la présence d’anomalies récurrentes et hétérogènes du gène CD274/PDL1 dans les cellules tumorales marquées par l’anticorps fluorescent rouge anti-CD30. Le premier cas montre 68 % de cellules présentant un « gain » PDL1, 22 % une « amplification », 6 % une polysomie du chromosome 9 et 2 % sans anomalie. Le second patient montre 64 % de cellules tumorales avec une « amplification » PDL1, 30 % avec un « gain » et 6 % sans anomalie. Par rapport à une FISH classique, Il faut 3h supplémentaires de technique correspondant à l’étape d’immunofluorescence CD30. Le temps d’analyse est d’environ 1h.

Cette technique est réalisable dans la plupart des laboratoires. Elle est applicable à tout les cancers impliquant la voie PD1/PDL1 [5Chinai J.M., et al. New immunotherapies targeting the PD-1 pathway Trends Pharmacol Sci 2015 ;  36 : 587-595 [cross-ref]

Cliquez ici pour aller à la section Références]. Cependant, son interprétation demande un temps d’analyse conséquent, plus adapté à de la recherche. Des études sur de plus grandes séries de patients sont nécessaires pour juger de son utilité.