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Le mélange de concentré de granulocytes de sang total (MCGST) comme alternative au concentré de granulocytes d’aphérèse (CGA) - 08/08/19

Preparation of pooled granulocytes concentrates from whole blood buffy coats (PGC) as an alternative to apheresis

Doi : 10.1016/j.tracli.2019.06.188 
R. Mastronardi a, S. Cleophax a, S. Begué b, M. Hurtado-Nedelec c, S. Gross b, T. Bocquet a, , R. Djoudi b
a Établissement français du sang- Île-de-France, avenue de l’Île-de-France, 95300 Pontoise, France 
b Établissement français du sang, 20, avenue du Stade-de-France, 93218 Saint-Denis, France 
c Inserm U1149, CNRS-ERL8252, hopitaux universitaire Paris Nord Val-de-Seine, 46, rue Henri-Huchard, 75018 Paris, France 

Auteur correspondant.
Sous presse. Épreuves corrigées par l'auteur. Disponible en ligne depuis le jeudi 08 août 2019
Cet article a été publié dans un numéro de la revue, cliquez ici pour y accéder

Résumé

Objectif

Le prélèvement de granulocytes par aphérèse impose l’utilisation de spécialités pharmaceutiques telles que l’HEA, les corticoïdes et l’héparine. Les donneurs sont alors exposés à l’ensemble des effets indésirables potentiels liés à cette prémédication. Le développement du MCGST utilisant les granuleux contenus dans les dons de sang total représente une alternative au CGA.

Méthode

Le mélange de concentré de granulocytes de sang total est obtenu par extraction des granulocytes issus de 20 couches leucoplaquettaires. Le procédé repose sur des étapes de centrifugation/séparation. La solution SSP+ améliore le niveau de la séparation et l’apport, en derrière phase de préparation, d’un volume de plasma permet d’assurer la bonne conservation pendant 48h. Viabilité, fonctionnalité et mobilité ont été évalués par des techniques d’exploration in vitro.

Résultats

n=18. En moyenne par unité produite : V=408±4mL, 2,2.1010±0,24PNN, Hte=18 %±3 %, 4,7.1011 plaquettes. La viabilité moyenne est de 95 %±6 % le jour de la préparation du MCGST(J1) et à 85 %±7 % après 24h de conservation (j2). La fonctionnalité moyenne (Index TNF) est de 1,36±0,25 à j1 et de 1,38±0,18 à j2. Les index de mobilité sont normaux à j1 et légèrement dégradés à j2 tout en restant normaux.

Conclusion

Le MCGST présente des caractéristiques in-vitro conformes aux standards de l’EDQM et proches de celles des CGA, notamment en termes de contenu en PNN et d’hématocrite. Les indicateurs qui explorent la viabilité et deux fonctions granulocytaires majeures, montrent qu’elles sont correctement préservées tout au long de la préparation et de la conservation du MCGST.

Le texte complet de cet article est disponible en PDF.

Abstract

Background

The collection of granulocytes by apheresis requires volunteer donor stimulation by corticoids and the use of HES, a compound which is currently challenged by potential safety issues. Preparation of pooled granulocytes concentrates from whole blood buffy coats (PGC) represent an alternative to apheresis with a better benefit/risk for the donors.

Method

Whole blood is collected in a bottom and top blood bag for buffy coat preparation. After centrifugation and separation, buffy coat are obtained. Twenty ABO matched buffy coats are selected for processing into one PGC. Four pools of five buffy coats were made, platelet additive solution is added to each pool, mixed gently and centrifuged. The red cell residue, supernatant and granulocyte rich layer are separated. Two granulocyte rich layers are pooled and added with 70mL of ABO matched plasma from the initial donations (=PGC10). The final PGC (=PGC20) is obtained by pooling two PGC10 into a platelet storage bag. Neutrophil content and in-vitro functionality are assessed at day of preparation (D1) and at expiry hour, 48 hours after collection (D2).

Results

On N=18, mean: Volume=408±4mL, 2.2*1010±0.24 neutrophils, Hematocrit=18%±3%, 4.7*1011platelets. Viability is well preserved: 95%±6% day of PGC preparation, 85%±7% after 24h of storage (D2). Functionality (ROS production measurement) is well preserved: 1.36±0.25 at D1 and 1.38±0.18 at D2. Expression and modulation of adhesion molecules after stimulation are normal at D1 and slightly decreased at D2 but still normal.

Conclusions

PGC20 in vitro characteristics are in conformance with the EDQM guide (V19) and similar to apheresis for granulocytes content and hematocrit. The viability and two mean indicators which explore neutrophil function are well maintained during PGC preparation and after 24 hours of storage.

Le texte complet de cet article est disponible en PDF.

Mots clés : Granulocytes, Polynucléaires neutrophiles, Transfusion, Concentré de Granulocytes d’Aphérèse, Mélange de concentré de granulocytes, Neutropénie, Infection

Keywords : Granulocytes, Neutrophils, Transfusion, Granulocytes from apheresis, Pooled granulocyte component, Neutropenia, Infection


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