Chaque jour, dans notre unité de production de nutrition parentérale, des mélanges binaires et ternaires sont produits par transfert aseptique en système clos de solutés stérile grâce à des automates. Afin de garantir leur qualité pharmaceutique, ces mélanges doivent répondre, entre autre, à un essai de stérilité tel que défini au 2.6.1 de la Pharmacopée Européenne 9.0. Actuellement, dans l’unité, 2 types de contrôles microbiologiques sont effectués : un contrôle environnemental par géloses dites de « contact et de sédimentation » et un contrôle du produit fini par mise en culture dans un flacon d’hémoculture d’échantillons prélevés sur la ligne de remplissage en début, milieu et fin de production. Afin d’améliorer la représentativité de cet échantillonnage, et de se rapprocher de ce qui est décrit dans la Pharmacopée Européenne, des essais de stérilité par filtration sur membrane seront réalisés en routine sur les poches de calibration et rinçage (PC) utilisées tout au long de la journée sur chaque automate. L’objectif de ce travail est donc de valider les essais de fertilité et d’applicabilité de cette méthode.

Le protocole a été rédigé selon la monographie 2.6.1 de Pharmacopée Européenne 9.0. Six germes ont été testés conformément à celle-ci : S. aureus, B. subtilis, P. aeruginosa, C. albicans, C. sporogenes et A. brasiliensis, deux autres germes ont été ajoutés : S. epidermidis, B. cereus. Le contenu de chaque PC a été transféré sur membrane à l’aide d’une pompe péristaltique placée dans un isolateur en surpression dédié. Puis le diluant de rinçage de la membrane préalablement contaminé par la souche d’intérêt a été filtré à son tour à travers cette membrane, permettant ainsi une contamination de notre produit à tester. Le filtre a été ensuite incubé dans 2 types de milieux, thioglycolate (Thio) à 30°C et hydrolysat de caséine et de soja (TSB) à 25°C. Pour chaque germe testé, 2 manipulations avec PC et sans PC (témoin positif) ont été réalisée ainsi qu’un témoin négatif par germe afin de valider les conditions opératoires. Le temps opératoire pour tester une souche a été estimé à 2heures. Une lecture visuelle a été faite quotidiennement puis une identification microbiologique a été réalisée à J3 pour les bactéries et à J5 pour les levures et moisissures.

Une croissance microbiologique a été observée dans chaque milieu contaminé et est comparable entre notre produit à tester et les témoins positifs. Seul le germe testé a été identifié dans chaque flacon. Aucun témoin négatif n’a présenté de croissance.

Les résultats obtenus sont conformes à la Pharmacopée Européenne 9.0. Les mélanges nutritionnels à tester ne présentent pas de propriétés inhibitrices. Les essais de fertilité et d’applicabilité sont donc validés pour cette méthode, qui sera réalisée en routine par les techniciens du laboratoire de contrôle de l’unité sur chaque ligne de remplissage utilisée.