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Dosage des stéroïdes par chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse en tandem avec préparation automatisée de l’échantillon - 30/09/20

Doi : 10.1016/j.ando.2020.07.257 
F. Fraissinet, Dr a, , T. Pereira b, F. Ziegler, Dr c, V. Brunel, Dr a
a Service de Biochimie Générale, CHU de Rouen, Rouen, France 
b Service de Pharmacologie, CHU de Rouen, Rouen, France 
c Service de Biochimie Générale, CHU de Rouen, Inserm U1073, Université de Rouen, Rouen, France 

Auteur correspondant.

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Résumé

Objectif La spectrométrie de masse (LC-MS/MS) est la méthode de référence pour l’analyse des stéroïdes sériques. Elle nécessite une préparation manuelle et une extraction liquide-liquide ou sur phase solide. L’objectif du travail est de valider une méthode de dosage de testostérone, delta-4 androstènedione, 17-OH-progestérone, 11-désoxycortisol et DHEA avec une préparation automatisée de l’échantillon.

Matériel et méthodes

Le système analytique comprend le spectromètre de masse LCMS 8060 (Shimadzu) et une chaîne HPLC Nexera X2 couplée au préparateur d’échantillons CLAM-2030. Le dosage nécessite 30μL de sérum. La séparation chromatographique est réalisée sur une colonne type Biphényl. La méthode a été validée par les critères suivants : précision, linéarité, dilution, spécificité, stabilité, effet matrice, comparaison de méthodes avec la RIA.

Résultats

Les temps de préparation et d’analyse varient de 6 à 13min avec des temps de rétention de 5 à 7min. Les CV de répétabilité et de reproductibilité ne dépassent pas 8,4 % et 6,3 %. Une bonne concordance avec la RIA est observée pour la testostérone chez l’homme et la 17-OHP, il existe un biais moyen de −20 % pour la testostérone chez la femme et l’enfant et de −31 % pour la delta-4 androstènedione.

Discussion

La préparation automatisée montre des performances analytiques similaires aux études précédentes [2, 1]. Elle permet de réduire le volume de sérum nécessaire et un gain de temps pour le rendu du résultat.

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Vol 81 - N° 4

P. 236 - septembre 2020 Retour au numéro
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