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Novel bio-analytical technique for estimation of gamma oryzanol in rat plasma and brain homogenate using HPLC - 07/11/20

Nouvelle technique bio-analytique pour l’estimation du gamma oryzanol dans le plasma et l’homogénat de cerveau de rat par CLHP

Doi : 10.1016/j.pharma.2020.07.003 
S. Singh a, C. Kothari a, , M. Patel a, S. Panchal b
a Department of Pharmaceutical Analysis, Institute of Pharmacy, Nirma University, Ahmedabad, India 
b Department of Pharmacology, Institute of Pharmacy, Nirma University, Ahmedabad, India 

Corresponding author.

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Highlights

A novel HPLC method has been developed for estimation of oryzanol in rat plasma as and brain homogenate.
Liquid-liquid extraction was the chosen method for sample clean-up due to high recovery.
Validation performed as per US-FDA guidelines falls within acceptable criteria.

Le texte complet de cet article est disponible en PDF.

Summary

Gamma oryzanol, a component of rice bran oil is used for its anticancer and antihyperlipidemic properties. Bioanalytical method for rat plasma and brain homogenate was developed by HPLC system with a PDA detector in which drug elution was performed using C-18 column (4.6mm×150cm, 5μ) with 1% acetic acid in methanol: acetonitrile (65/35, v/v) as mobile phase at 1.2ml/min flow rate and detected at 326nm wavelength. Liquid liquid extraction method was chosen for extraction of oryzanol from plasma as well as brain homogenate as it provided highest recovery (95% in plasma, 85% in brain homogenate). Various extraction solvents for each body fluid were analysed, out of which highest recovery for plasma (95%), in acetone: IPA (1/1, v/v) and for brain homogenate (85%) in isopropyl alcohol (IPA) was observed. Observed linearity was between 500ng/mL–5000ng/mL. The interday and intraday precision (i.e. %RSD) was less than 10% and accuracy was±5%. Selectivity and matrix effect was checked and found as per USFDA criteria. Plasma samples were found to be stable over the analysis period, HQC samples were stable up to third cycle in freeze and thaw stability while LQC samples were stable over fourth cycle. The method proved to be simple, useful and is appropriate, for preclinical and experimental research.

Le texte complet de cet article est disponible en PDF.

Résumé

Le gamma oryzanol, un composant de l’huile de son de riz, est utilisé pour ses propriétés anticancéreuses et antihyperlipidémiques. La méthode bioanalytique pour l’homogénéisation du plasma et du cerveau de rat a été développée par le système CLHP avec un détecteur RDP dans lequel l’élution de la drogue a été effectuée en utilisant la colonne C-18 (4,6mm×150cm, 5μ) avec de l’acide acétique à 1 % dans du méthanol: acétonitrile (65/35, v/v) comme phase mobile à un débit de 1,2 mL/min et détecté à une longueur d’onde de 326nm. La méthode d’extraction liquide a été choisie pour l’extraction de l’oryzanol du plasma ainsi que de l’homogénat cérébral car elle offrait le taux de récupération le plus élevé (95 % dans le plasma, 85 % dans l’homogénat cérébral). Différents solvants d’extraction pour chaque fluide corporel ont été analysés, parmi lesquels la récupération la plus élevée pour le plasma (95 %), dans l’acétone: IPA (1/1, v/v) et pour l’homogénat de cerveau (85 %) dans l’alcool isopropylique (IPA) a été observée. La linéarité observée se situait entre 500ng/mL et 5000 ng/mL. La précision inter et intra-journalière (c’est-à-dire %RSD) était inférieure à 10 % et la précision était de±5 %. La sélectivité et l’effet de matrice ont été vérifiés et trouvés selon les critères de l’USFDA. Les échantillons de plasma se sont avérés stables au cours de la période d’analyse, les échantillons ECMQ étaient stables jusqu’au troisième cycle en stabilité de gel et de dégel tandis que les échantillons ECAI étaient stables au cours du quatrième cycle. La méthode s’est avérée simple, utile et appropriée, pour la recherche préclinique et expérimentale.

Le texte complet de cet article est disponible en PDF.

Keywords : Oryzanol, Bio-analytical method, Brain homogenate, Rat plasma, Liquid–liquid extraction, HPLC

Mots clés : Oryzanol, Méthode bio-analytique, Homogénat de cerveau, Plasma de rat, Extraction liquide-liquide, CLHP

Abbreviations : ACN, CRB, HQCs, LLE, LLOQ, LOD, LOQ, LQCs, OZ, PP, SPE


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Vol 78 - N° 6

P. 515-524 - novembre 2020 Retour au numéro
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