Valider le dosage simultané de 4 métaux (Pb, Cd, Hg et As) en utilisant le dispositif hemaPEN de la société Trajan.

hemaPEN est un système de prélèvement et de dépôt sur disques papier d’un volume parfaitement mesuré de sang capillaire. Le dispositif comporte 4 capillaires en verre de 2,74μL, 4 disques de papier de 3,5mm et un dessicateur permettant la conservation des disques. Au contact d’une goutte de sang, les 4 capillaires se remplissent entièrement et simultanément puis, sont mis au contact des disques permettant le transfert du sang sur ces derniers. Nous avons choisi de valider 4 éléments d’intérêt toxicologique sur sang total (Pb, As, Hg, Cd). L’extraction utilise 400μL d’une solution comprenant Triton X-100 0,5 %, HNO3 0,05M, rhodium 1μg/L. Le dosage est réalisé par ICP-MS (NexION 2000™, Perkin Elmer) sur un disque extrait par 400μL de solution. Pb, Cd et Hg sont dosés en mode standard et As en mode DRC avec O2. Le rhodium est utilisé comme étalon interne. La validation analytique a été réalisée sur des filtres avec dépôt à la pipette de 2,74μL de sang. Le rapport final de dilution est de 1/145.

Les conditions d’extraction retenues permettent une récupération moyenne de 100 %, 106 %, 101 % et 99 % pour Pb, As, Cd et Hg respectivement. Les Ldq (10 sd du blanc) sont de 0,011μmol/L (2,3μg/L) pour Pb, 3,5 nmol/L (0,26μg/L) pour As, 0,2 nmol/L (0,04μg/L) pour Hg et 1 nmol/L (0,11μg/L) pour Cd. La répétabilité sur 3 niveaux est inférieure à 10 % pour les 4 éléments sauf Hg au niveau bas (14 %). L’analyse de 20 blancs « filtres » montre une contamination sans impact pour Pb, As et Hg. Pour Cd, la contamination est très variable et dépasse parfois les valeurs de référence du sang. L’exactitude, calculée par analyse de CQI, est satisfaisante pour Pb, As et Cd sauf pour les valeurs faibles de Cd en raison de la contamination des filtres. Pour Hg, elle n’est pas satisfaisante car les conditions analytiques ne sont pas celles utilisées en routine pour cet élément. Dix-sept sangs veineux de plombémie connue (0,035 à 3,60μmol/L) ont été déposés sur des filtres et analysés. L’équation de corrélation obtenue est : Pbfiltres=1,05×Pbroutine+0,004, r=0,9975. Enfin, 15 patients ont été testés pour le plomb avec le système complet et comparés au dosage de routine. Pour des valeurs de 0,05 à 2,38μmol/L, l’équation de corrélation obtenue est : PbhemaPEN=0,952×Pbroutine+0,07, r=0,990.

Nos résultats montrent qu’il est possible de doser avec de bonnes performances des métaux sur un volume de sang aussi faible que 2,74μL avec un facteur de dilution 3,6 plus important que celui d’une méthode de routine. Les résultats de la validation pour As et Pb sont bons et, pour Pb, satisfont les critères exigés pour l’accréditation. On observe une excellente corrélation entre les plombémies mesurées avec l’hemaPEN et le dosage de routine chez des patients. L’intérêt de ce type de dispositif microsampling est de disposer de 4 disques simultanément permettant soit de sensibiliser le dosage (élution de plusieurs disques) soit de doser des molécules organiques. Nos résultats valident l’utilisation de l’outil hemaPEN pour le dosage des métaux. Une application pour des études environnementales est en cours d’étude, nécessitant la maîtrise de la contamination lors du prélèvement, particulièrement pour le dosage du plomb.