L’objectif de ce travail a été de développer une méthode de criblage toxicologique en chromatographie gazeuse couplée à spectrométrie de masse (CG-SM), méthode de référence dans le domaine de la toxicologie hospitalière [1Allibe-Signorini, et al. Ann Toxicol Anal 2008 ;  20 (2) : 57-65 [cross-ref]

Cliquez ici pour aller à la section Références] en utilisant le logiciel de retraitement MassHunter Unkown Analysis (MHUA), applicable en routine pour des échantillons de plasma et d’urine et de l’évaluer.

La préparation des échantillons suit celle décrite par Grapp et al. [2Grapp, et al. Drug Test Analysis 2016 ;  8 : 816-825 [cross-ref]

Cliquez ici pour aller à la section Références]. La prise d’essai est de 1mL de matrice à laquelle est ajouté 50μL d’étalon interne (prazépam 1mg/L). L’extraction liquide-liquide est double à pH neutre et pH alcalin. La phase organique des 2 extractions est mélangée et évaporée sous azote à 50°C. Le résidu sec est repris avec 100μL d’acétate d’éthyle et 2μL sont injectés dans le système CG-SM. Les analyses sont effectuées avec un appareil CG Agilent 7890A et un appareil SM Agilent 5975C. Les injections sont réalisées en mode splitless. Les analytes sont séparés sur une colonne HP-5MS 30m×0,25mm ; 0,25μm (Agilent Technologies). Le gaz vecteur utilisé est l’hélium à un débit de 1mL/min. Un gradient de température est utilisé, il démarre à 100°C pendant 2min, puis augmente de 15°C/min jusqu’à 325°C, la durée totale est de 23min. La source d’ionisation fonctionne par impact électronique à une énergie constante de 70eV. Les ions sont analysés en mode full scan entre 44 et 600m/z. Les résultats ont été retraités grâce aux logiciel AMDIS et MHUA v10.1 avec 3 bibliothèques : SWGDRUG (3346 spectres) NIST (220 460 spectres) et une bibliothèque maison (>120 spectres). Les 58 échantillons de notre étude (12 urines et 46 plasmas) ont été adressés par les hôpitaux de l’agglomération marseillaise au laboratoire de Pharmacocinétique et de Toxicologie de la Timone pour recherche de toxiques. Ils ont été analysés en immunoanalyse et par CL-SM/SM sur une chaîne Alliance couplée à un Quattro 1er (Waters, États-Unis). En cas de dépistage positif pour les stupéfiants, ou de demande spécifique, une quantification est réalisée en CL-SM/SM sur une chaîne Acquity XEVO TQXS (Waters, États-Unis). Enfin, les échantillons sont analysés en CG-MS avec la méthode développée. Les résultats obtenus avec ces différentes méthodes sont ensuite comparés.

Sur 58 échantillons, 65 molécules ont été identifiées en CG-SM grâce au logiciel MH UA, 36 avec le logiciel AMDIS et 59 en CL-SM/SM. Dix-neuf molécules ont été identifiées en CG-SM et dosées en CL-SM/SM à des concentrations relativement basses, notamment la codéine (<10ng/mL), la MDMA (324ng/mL), la méthadone (84ng/mL), le diazépam (29ng/mL), la loxapine (21ng/mL) et la kétamine (39ng/mL). Plusieurs molécules difficilement détectables en CL-SM/SM ont été identifiées CG-SM (propofol, phénobarbital, acide valproïque), d’autres non incluses dans le criblage ciblé CL-SM/SM ont pu être identifiées grâce au criblage CG-SM (étomidate, lacosamide, laudanosine, phénytoïne, fluindione). A contrario, certaines molécules ont été identifiées uniquement en CL-SM/SM (bisoprolol, glicazide, paroxétine, zopiclone, flecaïnide).

Ce travail a permis de développer et d’optimiser une méthode de criblage CG-SM et d’évaluer le logiciel MHUA. En comparaison avec les autres approches évaluées, le criblage CG-SM a permis d’identifier un nombre plus important de molécules, bien que certaines ne soient pas identifiées ou présentent des limites de détection plus élevées. La méthode développée est donc complémentaire de la CL-SM/SM et de l’immunoanalyse et adaptée aux criblages toxicologiques réalisés dans le cadre hospitalier.