La fibrose, le dysfonctionnement immunitaire et la vasculopathie sont trois mécanismes impliqués dans le développement de la sclérodermie systémique, une maladie complexe multifactorielle encore incomplètement comprise. Les cellules stromales mésenchymateuses dérivées du tissu adipeux (ASC) et leurs vésicules extracellulaires ont prouvé leur efficacité thérapeutique dans des modèles murins précliniques de ScS [1Maria A., et al. Human adipose mesenchymal stem cells as potent anti-fibrosis therapy for systemic sclerosis J Autoimmun 2016 ; 31-3910.1016/j.jaut.2016.03.013 [cross-ref]

Cliquez ici pour aller à la section Références, 2Rozier P., et al. Mesenchymal stromal cells-derived extracellular vesicles alleviate systemic sclerosis via miR-29a-3p J Autoimmun 2021 ;  121 : 102660

Cliquez ici pour aller à la section Références]. Cependant, leur mécanisme d’action n’est pas totalement élucidé et pourrait être altéré dans les ASC de patients sclérodermiques (ScS) [3Rozier P., et al. Mesenchymal stem cells in systemic sclerosis: allogenic or autologous approaches for therapeutic use? Front Immunol 2018 ;  9 : 2938

Cliquez ici pour aller à la section Références]. L’objectif de ce projet était d’évaluer in vitro l’intérêt thérapeutique d’ASC-ScS et de comparer l’effet anti-fibrotique et immunosuppresseur d’ASC provenant de donneurs sains et de patients ScS. Pour cela, nous avons mis en place un modèle de fibroblastes reproduisant les caractéristiques de fibroblastes ScS par induction au TGFβ (Tβ-Fb).

Les ASC de donneurs sains ou ScS sont isolées de fractions stromales vasculaires et utilisées à passage 3. Des fibroblastes de peau de patients ScS (Fb-ScS) ou de donneurs sains (Fb) ont été isolés et amplifiés in vitro jusqu’au passage 3. Les Fb sont stimulés durant 24heures à l’aide de 5ng/mL de TGFβ1 pour obtenir des fibroblastes induits au TGβ1 (Tβ-Fb). Les Tβ-Fb sont ensuite incubés en coculture avec des ASC saines ou ScS placées dans des inserts (ratio 1 ASC : 3 Tβ-Fb) durant 24heures. L’expression de différents marqueurs de fibrose et de remodelage de la matrice extracellulaire est quantifiée par RT-qPCR. En parallèle, l’effet immunosuppresseur des ASCs saines et ScS est évaluée dans un modèle de prolifération lymphocytaire utilisant des cellules mononuclées du sang (PBMC) isolées à partir d’un pool de plasmas de donneurs sains et activées par 2,5μg/mL de phytohématoglutinine.

Nous avons montré que le modèle induit de fibroblastes Tβ-Fb reproduit les principales caractéristiques morphologiques et moléculaires de myofibroblastes, similaires aux Fb-ScS. Puis nous avons prouvé que les ASC sont capables de moduler l’expression de la plupart des marqueurs myofibroblastiques en régulant le phénotype de Tβ-Fb vers un phénotype de Fb sains. En parallèle, nous avons démontré que les ASC saines ou ScS sont capables de réduire la prolifération de PBMC activées.

Nous avons validé l’intérêt du modèle Fb-Tβ obtenu par stimulation de Fb sains l’aide de TGFβ1 caractérisé par un phénotype proche de celui des Fb-ScS de patients. Ainsi, nous avons montré que les ASC de donneurs sains ou de patients ScS ont un effet anti-fibrotique et immunosuppresseur équivalent. Ces outils d’études in vitro vont permettre de mieux comprendre les mécanismes d’action des ASC, notamment en identifiant un ou plusieurs médiateurs d’intérêt thérapeutique.