L’objectif de ce travail est de produire et caractériser des CART IL-1RAP « GMP-like », comparés aux CAR-T cells « expérimentaux » de grade recherche. Les CART sont obtenus par tri CD4/CD8 de PBMC de donneurs sains, puis activation CD3/CD28+IL-7/-15 (GMP-like, ClinMACS Prodigy®) vs IL-2 (expérimentale). L’efficacité de transduction est mesurée par cytométrie de flux. Le phénotypage des sous-populations T, la cytotoxicité (CD107a, IFNγ) et le métabolisme (Seahorse®), sont réalisés sur le produit fini (J9). Bien que la prolifération des CART IL-1RAP soit similaire, l’efficacité de transduction est meilleure en condition GMP-like (64,6 %±15,6 % vs 45,6 %±10,4 %). Le ratio CD4/CD8 est maintenu entre J0 et J9 en condition GMP-like par rapport au processus Expérimental (4,0±0,9, 4,0±1,9 & 1,7±0,7 respectivement). Nous avons montré en condition GMP-like vs Expérimentale respectivement : un profil principalement de type TSCM et TCM (48,8 %±0,8 % & 30,9 %±2,6 % vs 30,1 %±19,1 % & 18,5 %±6,5 %) et une meilleure cytotoxicité (CD107a+) après co-culture avec la lignée MonoMac-6 (34,1 %±9,8 % vs 3,4 %±2,0 %) ou la protéine IL-1RAP coatée (55,7 %±4,6 % vs 1,1 %±0,4 %) ; confirmé par la quantification d’IFNγ (3708pg/mL±2176pg/ml & 2535pg/mL±1352pg/mL). De plus, la comparaison CART GMP-like stimulés vs non stimulés montre une activation basale glycolytique avec un FC de 2,0±0,2, mais sans différence ni d’activité glycolytique maximale, suggérant une activation spécifique sans épuisement, ni du métabolisme oxydatif. Nous avons montré que notre procédé de production de CART IL-1RAP GMP-like répond aux exigences standards de production et pourra être appliqué dans un essai clinique « first in man » dans la LAM.