P015 Le niveau d’apport azoté module l’expression des enzymes du carrefour arginine-ornithine-citrulline dans les cellules Caco-2/TC7 - 19/05/08

Doi : 10.1016/S0985-0562(07)78817-9

G. Ventura ^a, C. Moinard ^a, V. Carrière ^b, J. Chambaz ^b, L. Cynober ^a, J. De Bandt ^a
^a Laboratoire de Biologie de la Nutrition, Faculté de Pharmacie, Paris, France
^b Inserm U505, Institut des Cordeliers, Paris, France

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Résumé

Introduction et but de l’étude

Le flux portal d’Arginine (Arg) est un élément clé de la régulation de l’uréogenèse hépatique. L’intestin est l’organe qui contrôle la disponibilité de l’Arg apportée par voie digestive. Cela dépendrait d’une modulation de l’expression de différentes enzymes (arginase, glutaminase, ornithine ami-notransférase (OAT) et argininosuccinate lyase (ASL) et synthétase (ASS)) par les apports en protéines de la ration alimentaire. Le but de ce travail a été d’étudier l’influence d’apports croissants en acides aminés (AA) sur l’expression de ces enzymes dans un modèle de cellules intestinales, les cellules Caco-2/TC7.

Matériel et méthodes

Des cellules Caco-2/TC7 ont été cultivées sur filtre semi-perméable pendant 15 jours en milieu standard puis ont été réparties en 4 groupes (n=3). Les cellules ont alors été exposées pendant 3 jours à différents milieux dépourvu d’AA (0), ou contenant des concentrations croissantes en AA, correspondant à une (1X), deux (2X) et quatre (4X) fois les concentrations physiologiques plasmatiques post-prandiales. Les ARNm codant pour les enzymes d’intérêt ont été quantifiés par PCR en temps réel. Les résultats ont été analysés par régression linéaire (test de Student sur la pente).

Résultats

Il existe une relation inverse entre les apports en AA et l’expression de la glutaminase (p= 0,028), de l’OAT (p= 0,035), de l’ASS (p= 0,028) et de l’arginase (p= 0,058).

Conclusions

Cette étude montre pour la première fois un effet direct des AA sur la régulation au niveau transcriptionnel des enzymes du carrefour intestinal de l’arginine en fonction de l’apport
Tableau 1[AA]GlutaminaseArginaseOATASSO1,03 ± 0,342,85 ± 1,81,33 ± 1,441,49±0,481X1,05 ± 0,190,96 ± 0,011,02 ± 0,010,91 ± 0,102X0,34 ± 0,051,11 ± 0,150,42 ± 0,070,55 ± 0,024X0,37 ± 0,100,27 ± 0,070,29 ± 0,040,52 ± 0,11Les niveaux d’expression des différentes enzymes, rapportées à la quantité d’ARNr 18S

[AA]	Glutaminase	Arginase	OAT	ASS
O	1,03 ± 0,34	2,85 ± 1,81	,33 ± 1,44	1,49±0,48
1X	1,05 ± 0,19	0,96 ± 0,01	1,02 ± 0,01	0,91 ± 0,10
2X	0,34 ± 0,05	1,11 ± 0,15	0,42 ± 0,07	0,55 ± 0,02
4X	0,37 ± 0,10	0,27 ± 0,07	0,29 ± 0,04	0,52 ± 0,11

Les niveaux d’expression des différentes enzymes, rapportées à la quantité d’ARNr 18S

azoté. Cette régulation permettrait ainsi, dans des situations de faibles apports azotés, de favoriser la synthèse intestinale de citrulline et par conséquent la néosynthèse rénale d’Arg. Lors d’apports azotés plus importants, cela favoriserait le passage de l’Arg absorbée dans le système porte et donc une stimulation adaptée de l’uréoge-nèse hépatique.

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