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SFCP-010 – Chirurgie viscérale – Biosécurité et thérapie génique : le gène suicide HSV-TK dans un modèle pré-humain - 26/06/08

Doi : 10.1016/S0929-693X(08)71962-6 
J. Birraux, O. Menzel, B. Wildhaber, W. Habre, C. Jond, T.H. Nguyen, C. Chardot
Hôpital des Enfants, Genève, Suisse 

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Résumé

Antériorités

L’approche de la thérapie génique ex vivo suivi d’une auto transplantation des hépatocytes (Hc) corrigés génétiquement par des lentivirus est une alternative intéressante à la transplantation hépatique dans le cadre de plusieurs maladies métaboliques hépatiques. Cette approche permet de corriger le déficit de manière stable, et nous avons montré que les vecteurs lentiviraux transduisent efficacement les Hc humains. Nous avons décrit le protocole SLIT (transduced in Suspension with Lentiviral vectors and Immediately Transplanted) et démontré son efficacité dans plusieurs modèles animaux. La crainte majeure liée à cette technique est l’émergence de clones non contrôlés d’Hc, puisque l’insertion du génome du lentivirus se fait de manière aléatoire dans celui de la cellule cible, et peut donc se faire devant un proto-oncogène. Le gène suicide HSV-TK produit une thymidine kinase (TK) de manière constitutive. Le Ganciclovir agit comme pro-drogue et est métabolisé par la TK en un triphosphate hautement toxique qui bloque la synthèse d’ADN et induit l’apoptose cellulaire.

But

Evaluer l’efficacité du gène suicide HSV-TK dans un modèle pré-humain (Macaca fascicularis).

Méthode

Un vecteur lentiviral codant pour l’érythropoïétine de macaque et pour le gène suicide HSV-TK sous le contrôle du promoteur hépatospécifique mTTR (murine transthyretin promoter fusionné à un enhancer synthétique hépatocyte spécifique) a été construit. Les Hc primaires isolés et purifiés du lobe gauche du foie d’un macaque sont transduits en suspension pendant 2 heures, lavés puis retransplantés par injection dans une branche de la veine mésentérique. Des biopsies hépatiques ont été effectuées à 6 et 11 mois pour recherche du gène par PCR quantitative. Les animaux ont été ensuite mis sous Ganciclovir, puis sacrifiés à 12 mois, avec à nouveau des biopsies du foie.

Résultats

La PCR quantitative démontre la présence du transgène dans le génome des Hc de macaque transplanté à 6 et 11 mois. Elle est par contre négative dans les biopsies effectuées après le traitement au Ganciclovir.

Conclusions

L’activation de la TK produite par le gène suicide permet l’élimination sélective de toutes les cellules transduites. L’adjonction de ce gène permet donc d’accroitre la sécurité de notre protocole SLIT.

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Vol 15 - N° 5

P. 890 - juin 2008 Retour au numéro
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  • SFCP-009 – Chirurgie viscérale – Nouvelle approche chirurgicale appliquée à la thérapie génique hépatique
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