Parmi les atteintes pulmonaires dues aux moisissures du genre Aspergillus , l'aspergillose pulmonaire chronique (APC) est une maladie dont le diagnostic complexe repose sur un faisceau d'arguments cliniques, biologiques et d'imagerie. C'est une maladie lentement destructrice après colonisation chronique par Aspergillus sp., qui se développe en plusieurs mois chez des patients non ou modérément immunodéprimés, mais qui présentent différentes situations favorisantes, parmi lesquelles de nombreuses maladies respiratoires chroniques. En France, plus de 17 000 cas d'APC ont été hospitalisés sur une période de 10 ans allant de 2009 à 2018. Après un rappel de la complexité des formes nosologiques de l'infection, cet article expose les éléments essentiels du diagnostic biologique qui repose sur trois types d'outils : tout d'abord la mise en évidence directe du champignon via l'examen direct et la culture des prélèvements respiratoires. Au-delà de l'intérêt diagnostique, cette étape permet d'apprécier la diversité des espèces et la sensibilité in vitro aux antifongiques des Aspergillus responsables d'APC. La sérologie, avec la détection d'immunoglobulines G antiaspergillaires, est indispensable au diagnostic, mais ses performances varient selon les méthodes utilisées et le contexte clinique. Enfin, les outils de biologie moléculaire peuvent se déployer pour répondre à différents objectifs : détection d'acide désoxyribonucléique d' Aspergillus dans les prélèvements pulmonaires, séquençage moléculaire pour l'identification à l'espèce de l'isolat en cause, ou séquençage du gène cyp51A dont certaines mutations sont associées à des profils de résistance aux antifongiques azolés. Les approches métagénomiques et de séquençage du génome entier sont encore en cours d'évaluation. Une probable sous-estimation de la prévalence associée à une mortalité à 5 ans généralement comprise entre 30 et 55 % incite à sensibiliser davantage sur la démarche diagnostique afin d'optimiser la prise en charge de cette maladie en fonction du terrain sous-jacent et de la zone géographique.