Évaluation d'une technique simple et rapide de détection de microdélétions du bras long du chromosome Y - 01/01/03
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Résumé |
Objectifs. - Les microdélétions du chromosome Y sont une cause de troubles sévères de la spermatogenèse. Leur recherche est conseillée avant réalisation de l'ICSI. Le but de notre étude est de valider une méthode simple et rapide de détection de ces microdélétions.
Patients et méthodes. - Dix-sept patients infertiles présentant une microdélétion du chromosome Y, préalablement diagnostiquée, ont été inclus dans cette étude. L'ADN a été extrait à partir 1) de lymphocytes du sang périphérique et 2) de cellules buccales recueillies à l'aide d'écouvillons par brossage interne des joues. La quantification des solutions d'ADN a été réalisée par spectrophotométrie et par bandelettes colorimétriques. Les microdélétions ont été recherchées avec 1) une technique PCR adaptée des recommandations internationales et 2) un kit commercialisé (Promega).
Résultats. - L'extraction d'ADN à partir des cellules buccales a été possible dans tous les cas avec obtention de 4 à 10 μg d'ADN par cytobrosse. Le kit Promega® a posé certains problèmes : 1) une délétion en AZFa non identifiée et 2) les marqueurs sY130, sY133 et sY153 donnent un signal positif faible pouvant aboutir à des résultats faussement positifs et faussement négatifs.
Discussion et conclusion. - L'utilisation du kit Promega® s'est révélée délicate, avec des marqueurs mal répartis sur le bras long du chromosome Y. Nous proposons une stratégie simple, rapide et non invasive de détection des microdélétions du chromosome Y, conforme aux recommandations internationales, permettant d'évoluer vers une standardisation des techniques.
Mots clés : Chromosome Y ; Infertilité masculine ; PCR.
Abstract |
Objectives. - Recent investigations showed a high prevalence of Y chromosome microdeletions in men with severely impaired spermatogenesis. Screening for these men is recommended prior to assisted reproduction techniques. The aim of this study was to set up a simple method to detect Y deletion in infertile men. First, we tested the feasibility of cytobrush to collect oral cells as source of DNA. Second, we compared a classic PCR corresponding to European recommendations to the Promega kit®.
Patients and methods . - Seventeen infertile male patients with previously characterized deletions were included in the present study, after fully informed written consent. Both oral cells and blood were used for DNA extraction. A specific DNA extraction protocol was carried out on the buccal cells. The DNAs were tested for Y deletion screening by two different methods.
Results. - We retrieved between 4 and 10 μg of DNA per brush from buccal cells, allowing several multiplex PCR. The Promega kit® detected all the deletions but one: an AZFa deletion was not detected by the two markers of the kit covering this region. In addition, sY130, sY133 and SY153, included in the kit, are not reliable.
Discussion and conclusions. - Buccal cells represent a convenient substitute for blood in testing for Y microdeletions. Both false negative and false positive results were obtained with Promega Kit®. On the opposite, PCR according to the European recommendations allow the accurate detection of Y microdeletion in our 17 cases, at a lower cost.
Mots clés : Y chromosome ; Male infertility ; PCR.
Plan
Vol 32 - N° 1
P. 34-41 - janvier 2004 Retour au numéroBienvenue sur EM-consulte, la référence des professionnels de santé.
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