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P.28 - Marqueurs sériques de diagnostic du cancer colorectal par approche protéomique : électrophorèse bidimensionnelle, chromatographie liquide et la spectrométrie de masse en tandem (gel 2D/LC/MS-MS) - 02/04/09

Doi : GCB-03-2009-33-HS1-0399-8320-101019-200901767 

JP Roperch [1],

B Sarazin [2],

H Mansour [1],

I Sobhani [1]

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Introduction : Diagnostiqué précocement, le pronostic du cancer colorectal (CCR) s’améliore et son coût diminue. Un dépistage organisé est mis en place pour atteindre cet objectif par la présélection des individus pour coloscopie sur la recherche de sang dans les selles, seul test recommandé (Hemoccult®). Néanmoins, ses performances sont limitées par des faux positifs (55 %) menant à des coloscopies normales, et de faux négatifs ne dépistant pas précocement 50 % des individus. Il existe un réel besoin d’outils diagnostiques plus performants. L’objectif est de proposer une signature protéique du CCR par une analyse protéomique classique exhaustive utilisant gel 2D/LC/MS-MS.

Patients et Méthodes : La cartographie des protéines a été réalisée sur 3 pools (P) distincts de sérums regroupant les individus avec coloscopie normale (Normaux ou PN : N = 60), les sujets avec polypes adénomateux (PA, N = 30) ou cancer (PC ; N = 30). Les conditions expérimentales de l’électrophorèse 2D ont été, pH 5-8 (strip) pour la 1ère dimension et gel d’acrylamide homogène à 12 % pour la 2ème dimension. Deux séries de migration ont été réalisées, chacune 3 fois. La 1ère série comportait des protéines totales sur gel et la 2ème de protéines déplétées en Albumine et en IgG. Les gels ont été calibrés sur des pepetides de PM 15 kD à 250 kD. L’analyse bioinformatique des gels comprenait le dénombrement des spots et leur quantification par le logiciel Mélanie en manière séquentielle. Ensuite, les spots d’intérêt ont été juxtaposés avec ceux identifiés dans la carte de référence (Swiss-prot/Gel 2D), les spots ne présentant pas de concordance ont été excisés, digérés par la trypsine, puis séparés par chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse en mode tandem. L’ensemble des masses peptidiques (m/z) générées a été soumis au logiciel MASCOT (Genebio) permettant de déterminer totalement ou partiellement la séquence en acides aminés du peptide d’intérêt.

Résultats : Plus de 500 spots ont été identifiés, 216 (43 %) ont pu être totalement analysés. Ils se répartissaient en 4 catégories : 171 (79 %) d’expression non différentielle (PN = PA = PC), 16 (7 %) correspondaient à une surexpression lésionnelle (PC>PA>PN), 19 (9 %) à une sous-expression (PN>PA>PC) et 10 (5 %) à une expression spécifique (présence uniquement dans le cancer). Certaines protéines (albumine, l’haptoglobine, la transthyrétine, l’⍺1 antitrypsine, et le fibrinogène) identifiées par cette analyse ont été rapportées dans la littérature, d’autres (N = 13) jamais rapportées dans le CCR et sont des marqueurs d’intérêt potentiels ; certaines d’entre elles semblent impliquées dans des pathologies immunitaires, inflammatoires ou cardiovasculaires.

Discussion : La découverte des protéines comparables à celles déjà rapportées témoigne de la qualité des échantillons. De nouveaux marqueurs sont mis en évidence.

Conclusion : Un dosage immunologique conventionnel (Elisa) dans une biobanque* d’effluents biologiques de plus de 600 individus est en cours.

Remerciements, financements, autres : Avec le concours des centres CHIC, Bichat, HEGP, VSG, Mondor, Avicenne et 20 gastroentérologues libéraux, soutien de la LNCC, de l’Inserm et du CIC Henri Mondor.




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Vol 33 - N° HS1

P. 33 - mars 2009 Retour au numéro
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  • P.27 - Profils de méthylation de l’ADN dans les effluents biologiques du sujet atteint d’une tumeur colique ou rectale
  • H Mansour, R Incitti, JP Roperch, S Letulle, P Laurent Puig, I Sobhani
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  • P.29 - Etude prospective monocentrique des facteurs de risque de polypes colorectaux : adénomes avancés, adénomes, polypes hyperplasiques
  • U Chaput, S Alberto, G Baron, P Ravaud, F Beuvon, B Terris, R Coriat, M Bensoussan, H Roche, M Gaudric, F Prat, S Chaussade

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