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D014 Les cellules mononucléées “lineage negative” issues de la moelle osseuse sont une source importante de cellules progénitrices endothéliales - 17/04/09

Doi : 10.1016/S1875-2136(09)72224-7 
V. Barbay 1, V. Richard 2, J.-Y. Borg 1, O. Boyer 1, C. Thuillez 2, E. Brakenhielm 2
1 CHU de Rouen, Rouen, France 
2 Inserm U644, Rouen, France 

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Résumé

Objectif

La thérapie cellulaire basée sur l’utilisation de cellules progénitrices endothéliales (CPE) issues de la moelle osseuse ou du sang périphérique permet d’améliorer la neovascularisation après un infarctus du myocarde. Cependant, les cellules utilisées lors de telles thérapies sont souvent hétérogènes, et leur mécanisme d’action mal connu : réelle incorporation dans la paroi vasculaire ou effet paracrine promouvant l’angiogenèse ? Ainsi, nous avons voulu identifier quelle sous-population de cellules mononucléées issues de la moelle osseuse de souris contenait le plus de CPE ayant la capacité de générer des cellules endothéliales matures en culture.

Méthodes

Nous avons évalué différentes techniques de sélection : la séparation par gradient de densité qui permet d’obtenir des cellules mononucléées, les sélections magnétiques « Lineage negative » (Lin-), Sca-1+, et c-kit+ ainsi que la sélection c-kit+/VEGFR-2+. L’expression des marqueurs endothéliaux matures a été étudiée par immunocytochimie, cytométrie en flux, et RT-PCR surles colonies obtenues.

Résultats

Les colonies apparaissaient au 8e jour de culture. Letri Lin- permettait d’obtenir le plus grand nombre de colonies par rapport aux autres tris. Les analyses immunocytochimiques et cytométriques montraient qu’à l’intérieur des colonies Lin-, c-kit+ et de celles dérivant des cellules mononucléées, une majorité de cellules était LDL+, Lectine+, VEGFR-2+, CD31+ et CD144+, c’està-dire à caractère endothélial mature. Cependant, les colonies dérivées des cellules mononucléées semblaient également contenir des cellules fibroblastiques comme le montrait une expression plus importante du gène FSP-1. Par ailleurs, la cytométrie en flux a montré que les colonies Sca-1+ n’avaient majoritairement pas un phénotype endothélial (1 à 2 % de cellules VEGFR-2+ et CD31+), et que 35 % des cellules exprimaient le CD11b, correspondant à un phénotype monocytaire.

Conclusion

La population cellulaire Lin- issue de la moelle osseuse de souris est une source importante de CPE. En effet, la culture de cellules Lin- parait être la plus adaptée pour générer des cellules endothéliales matures, si on la compare à la culture de cellules Sca-1+, c-kit+ ou de cellules mononucléées. La population Lin- constituerait donc une cible de choix pour la thérapie cellulaire destinée à stimuler la vasculogenèse.

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Vol 102 - N° S1

P. S41 - mars 2009 Retour au numéro
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