La préparation du greffon endothélial est probablement l’étape la plus difficile lors de la greffe endothéliale. L’objectif de cette étude est de valider la faisabilité de la préparation et de l’envoi des greffons endothéliaux par les banques de cornées vers les sites greffeurs.

Dix cornées expérimentales, maintenues en organoculture depuis 7 à 10 jours, ont été utilisées au cours d’une première expérience. La dissection du greffon endothélial a été réalisée sur une chambre antérieure artificielle. L’endothélio-descemet a été séparé du stroma à l’aide d’une spatule puis isolée aux ciseaux sur 350° avant remise en culture à 31 °C. La densité cellulaire endothéliale (DCE) a été mesurée après coloration au bleu trypan avant dissection et 48 heures après. Cinq paires de cornées ont été utilisées au cours de la deuxième phase. Pour chaque paire, une cornée a bénéficié d’une dissection endothéliale tandis que l’autre a servi de témoin. Les deux cornées ont été adressées dans les 48 heures par transporteur vers un laboratoire collaborateur distant de 600km. Les cornées ont bénéficié alors d’une nouvelle mesure de la DCE puis d’une évaluation de la mortalité et de la viabilité cellulaire par triple coloration Hoechst/Éthidium homidimère/Calcéine.

Le greffon endothélial restait bien plaqué au stroma dans tous les cas pendant sa conservation et son transport. Il se détachait ensuite facilement par simple section de la charnière laissée en place. La DCE moyenne était de 2 767 cellules/mm² (de 2 434 à 2 984) avant découpe endothéliale et passait à 2 687 cellules/mm² (de 2 419 à 2 982) après 48 h, ce qui représente une perte cellulaire de 3 % (médiane=1 %). La perte maximale sur cette série était de 15 %. Le pourcentage de cellules mortes était inférieur à 1 % dans tous les cas après découpe. La triple coloration HEC confirmait la bonne viabilité endothéliale après transport.

Il est possible d’envisager laréalisation d’une série clinique de greffes endothéliales avec des greffons prédécoupés, lors d’un protocole validé.

Nos travaux confirment la possibilité de préparer à l’avance les greffons endothéliaux en vue de leur greffe. Ceci devrait permettre une meilleure diffusion de cette technique dont les avantages ne sont plus à démontrer.