Differential effect of plasma or erythrocyte AGE-ligands of RAGE on expression of transcripts for receptor isoforms - 13/11/09
Abstract |
Aim |
Binding of advanced glycation end-products (AGEs) to the receptor for AGEs (RAGE) contributes to diabetic vascular complications. RAGE transcript splicing generates membrane-bound proteins [full-length (FL) and N-truncated (Nt)] and a soluble protein [endogenous secretory (esRAGE)] that may act as a decoy. We tested the effect of AGE-ligands on the regulation of RAGE isoforms and the consequences on red blood cell (RBC) adhesion.
Methods |
RAGE isoforms were measured by real-time RT-PCR assay, using a LightCycler System, in human umbilical vein endothelial cells (HUVECs), incubated with either characterized AGEs [N-(carboxymethyl)lysine human serum albumin (CML-HSA) and methylglyoxal-modified HSA (MG-HSA)] or with RBCs from diabetic patients (DRBCs). Inhibition of RAGE access was achieved by using blocking either anti-RAGE antibodies or recombinant RAGE. Adhesion of DRBCs to endothelium was measured under flow conditions using HUVECs stimulated with MG-HSA or CML-HSA. Antibodies directed to RBC membrane proteins were tested for blocking DRBC adhesion in static conditions.
Results |
MG-HSA stimulated the expression of membrane-bound RAGE (FL+Nt) and esRAGE transcripts to similar extents, while CML-HSA and DRBC more selectively induced mRNA for FL and Nt-RAGE. Anti-RAGE antibody inhibited the effect of glycated proteins. Stimulation of HUVECs with CML-HSA enhanced DRBC adhesion, while MG-HSA had no effect. CD233 (band 3) was glycated in DRBC membrane, and anti-CD233 antibodies inhibited the adhesion of DRBCs, as did the anti-RAGE and anti-AGE antibodies.
Conclusions |
Receptor engagement by distinct AGEs differentially enhances expression of RAGE isoforms and DRBC adhesion. The CML-adduct, by facilitating adhesion, has more deleterious effects than MG-derived AGEs.
Le texte complet de cet article est disponible en PDF.Résumé |
Introduction |
L’activation par les produits de glycation avancée (AGE) du récepteur des AGE (RAGE) est un évènement précoce dans le développement des complications vasculaires du diabète. Le RAGE est soumis à un épissage alternatif qui génère des protéines membranaires (full-length [FL], N-truncated [Nt]) et une protéine soluble (endogenous secretory [esRAGE]) qui pourrait capter les AGE. Nous avons étudié l’effet de deux types d’AGE sur la régulation des isoformes du RAGE et les conséquences sur l’adhésion des globules rouges (GR) à l’endothélium.
Méthodes |
Les isoformes du RAGE ont été mesurées par RT-PCR en temps réel au LightCycler dans des cellules endothéliales humaines de la veine du cordon ombilical (HUVEC). Les cellules ont été incubées en présence de deux AGE caractérisés (la N-carboxymethyllysine-albumine humaine [CML-HSA] et les AGE dérivés du méthylglyoxal [MG-HSA]) ou avec des GR de patients diabétiques (GRD). L’accès au RAGE a été bloqué avec un anticorps anti-RAGE ou du RAGE recombinant soluble. L’adhésion des GR aux cellules endothéliales a été mesurée dans un système en flux après activation des HUVEC par la CML-HSA ou la MG-HSA. Des anticorps dirigés contre les protéines de la membrane du globule rouge ont également été testés dans des expériences d’adhésion en condition statique.
Résultats |
En se liant au RAGE, la MG-HSA stimule de manière comparable les isoformes FL, Nt et esRAGE, alors que la CML-HSA et les GRD stimulent l’expression des isoformes membranaires (FL+Nt), mais non l’esRAGE. L’adhésion des GRD aux cellules endothéliales est augmentée de façon significative après stimulation avec la CML-HSA, comparativement aux cellules non stimulées, la MG-HSA n’augmente pas l’adhésion. En empêchant l’interaction AGE-RAGE par des anti-AGE, de l’anti-RAGE ou du RAGE soluble, l’adhésion des GRD est normalisée, de même qu’avec un anti-CD233 (Band3), protéine fortement glyquée chez le patient diabétique.
Conclusion |
Des AGE différents modulent différemment l’expression des isoformes du RAGE et l’adhésion des GR. Contrairement aux AGE dérivés du MG, la CML-HSA facilite l’adhésion des GR dont les conséquences sont délétères.
Le texte complet de cet article est disponible en PDF.Keywords : Diabetes, Advanced glycation endproducts, AGE, RAGE, Red blood cell, Adhesion
Mots clés : Diabète, Produits de glycation avancée, AGE, RAGE, Globule rouge, Adhérence
Plan
Vol 35 - N° 5
P. 410-417 - novembre 2009 Retour au numéroBienvenue sur EM-consulte, la référence des professionnels de santé.