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Cinétique de croissance in vitro des cellules épithéliales cultivées à partir d’explants limbiques humains - 27/09/10

Doi : 10.1016/j.jfo.2010.04.002 
V. Borderie a, , b , P. Borderie b, É. Basli a, A. Piquemal b, C. De Sousa b, P. Goldschmidt a, L. Laroche a, A. Fialaire b
a U968, plateforme de thérapie cellulaire, centre de recherche, institut de la Vision, Inserm, université Pierre-et-Marie-Curie, CHNO des Quinze-Vingt, 28, rue de Charenton, 75571 Paris cedex 12, France 
b Banque de tissus, établissement français du Sang, Île-de-France, 53, boulevard Diderot, 75571 Paris, France 

Auteur correspondant.

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Résumé

But

Évaluer la cinétique de la croissance des cellules épithéliales limbiques in vitro à partir d’explants limbiques prélevés sur des greffons conservés en organoculture.

Patients et méthodes

Vingt et un explants limbiques prélevés sur les collerettes cornéosclérales de greffons cornéens humains conservés en organoculture pendant 18 à 24 jours ont été cultivées à 37°C pendant dix, 13 ou 18 jours. La surface du voile cellulaire a été mesurée pendant la culture à l’aide d’un logiciel. En fin de culture, les cellules dissociées ont été comptées et analysées en immunoperoxydase.

Résultats

La courbe de la surface du voile cellulaire (S) en fonction de la durée de culture (t) est décrite au mieux par un modèle polynomial d’équation S=0,024t30,038t20,044t+0,092. La durée moyenne du cycle cellulaire est de 24 heures. La croissance cellulaire est d’autant plus grande que le délai post-mortem de prélèvement du donneur est court. La plupart des cellules expriment la cytokératine-3 (expression variable d’une cellule à l’autre). Plus de 50 % des cellules expriment la vimentine.

Conclusion

Le limbe prélevé sur un greffon cornéen humain conservé en organoculture pendant trois semaines conserve un potentiel de prolifération cellulaire compatible avec une utilisation thérapeutique pour une allogreffe de limbe ou une thérapie cellulaire épithéliale cornéenne allogénique. Le potentiel de croissance des cellules épithéliales limbiques est cependant altéré par l’ischémie froide post-mortem du donneur et le délai post-mortem de prélèvement des cornées doit donc être aussi court que possible.

Le texte complet de cet article est disponible en PDF.

Summary

Purpose

To assess limbal epithelial cell growth kinetics in vitro using tissue retrieved from organ-cultured donor corneas.

Patients and methods

Twenty-one limbal explants were retrieved from corneoscleral rims of donor corneal grafts preserved for 18–24 days in organ culture. The explants were cultured at 37°C for 10, 13, or 18 days. The epithelial cell sheet area was measured during culture by means of morphometry. At the end of culture, the dissociated cells were counted and analyzed by immunocytochemistry.

Results

The curve of the epithelial cell sheet area (S) in relation to culture time (t) was best fitted by a polynomial model (S=0.024t30.038t20.044t+0.092). The average duration of the cell cycle was 24h. Cell growth decreased as donor tissue retrieval postmortem time increased. Cultured cells featured various expressions of cytokeratin-3 ranging from absent (few cells) to strong. More than 50% of cells expressed vimentin.

Conclusion

Limbal tissue retrieved from donor tissue that was organ-cultured for 3 weeks maintains a potential for cell renewal and growth compatible with clinical use for limbal allograft transplantation or cultured stem cell transplantation. However, cell growth potential is impaired by donor postmortem ischemia, which implies that tissue must be retrieved as soon as possible after donor death.

Le texte complet de cet article est disponible en PDF.

Mots clés : Cornée, Cinétique, Culture cellulaire, Épithélium, Limbe

Keywords : Cornea, Cell culture, Epithelium, Kinetics, Limbus


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Vol 33 - N° 7

P. 465-471 - septembre 2010 Retour au numéro
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