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In vitro and in vivo cell surface expression of a thiol-specific antioxidant-like protein in Candida albicans - 01/01/05

Doi : 10.1016/j.mycmed.2004.12.001 
V. Apaire-Marchais , J. Cottin, A. Marot-Leblond, C. Lefrançois, G. Tronchin, R. Robert
Groupe d'Etude des Interactions Hôte-Parasite, UPRES-EA 3142, UFR des Sciences Pharmaceutiques et d'Ingénierie de la Santé, 16 Bd Daviers, 49045 Angers cédex, France 

*Corresponding author.

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Abstract

Objective. - Among potential virulence factors of Candida albicans, are hydrophobic hyphal surface proteins.

Methods. - A cDNA library was therefore constructed from germ tube mRNAs, and immunoscreened with a rabbit immune serum raised against purified hydrophobic hyphal proteins.

Results. - Analysis of the nucleotide and deduced amino acid sequences of one selected clone revealed an open reading frame encoding a protein of 196 amino acid residues with a molecular mass of 25-kDa. Significant homology was shown with a class of thiol-specific antioxidant (Tsa) like enzymes present in prokaryotes and eukaryotes. A 73% identity was obtained with Saccharomyces cerevisiae Tsa1p. Reverse transcription-quantitative PCR showed the expression of C. albicans TSA-like gene in both blastoconidia and germ tubes, with a 15-fold overexpression in germ tubes. However, in vitro studies using anti-peptide antibodies and confocal microscopy demonstrated the presence of the corresponding protein at the surface of the hyphal part of germ tubes exclusively.

Conclusion. - In conclusion, this protein which was synthesized in both blastoconidia and germ tubes, was expressed at the surface of the invasive forms in vitro, but also in vivo in a murine model. Therefore, it could play a role in pathogenesis of C. albicans.

Le texte complet de cet article est disponible en PDF.

Résumé

Objectif. - Les protéines hyphales hydrophobes de surface comptent parmi les facteurs de virulence potentiels de Candida albicans.

Méthodes. - Ainsi, une banque d'ADNc a été construite à partir d'ARNm de tubes germinatifs, et immunocriblée avec un immunsérum de lapin dirigé contre les protéines hyphales hydrophobes purifiées.

Résultats. - L'analyse de la séquence nucléotidique et de la séquence d'acides aminés déduite de l'un des clones sélectionné a révélé un cadre ouvert de lecture codant une protéine de 196 acides aminés ayant une masse moléculaire de 25 kDa. Une homologie significative de cette séquence a été montrée avec les séquences d'une classe d'enzymes antioxydantes, thiol-spécifiques, présentes chez les procaryotes et les eucaryotes. Une identité de 73% a été obtenue avec la protéine Tsa1 de Saccharomyces cerevisiae. La RT-PCR quantitative a montré l'expression du gène TSA-like de C. albicans à la fois pour la forme blastospore et pour la forme tube germinatif, avec une sur-expression de 15 fois pour ces tubes germinatifs. Des études complémentaires in vitro, utilisant des anticorps anti-peptides et la microscopie confocale, ont démontré la présence de la protéine correspondante exclusivement à la surface de la partie hyphale des tubes germinatifs.

Conclusion. - En conclusion, nous avons révélé que cette protéine Tsa-like de C. albicans était synthétisée à la fois par les blastospores et les tubes germinatifs et qu'elle était exprimée à la surface des formes invasives in vitro, mais aussi in vivo dans un modèle murin. Elle pourrait donc jouer un rôle dans la pathogénicité de C. albicans.

Le texte complet de cet article est disponible en PDF.

Keywords : Candida albicans, Germ tubes, cDNA, Tsa-like protein, Hydrophobic surface proteins

Mots clés : Candida albicans, Tubes germinatifs, ADNc, Protéine Tsa-like, Protéines hydrophobes de surface


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Vol 15 - N° 1

P. 1-12 - mars 2005 Retour au numéro
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