Monitoring the interaction between DNA and a transcription factor (MEF2A) using fluorescence correlation spectroscopy - 01/01/05
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Presented in the framework of the European workshop on Fluorescence Correlation - Spectroscopy Techniques Applications in Biology, Medicine and Pharmacology, Faculty of Medicine of Paris-Sud, Le Kremlin-Bicêtre, France, 24 & 25 March 2005
Abstract |
Fluorescence correlation spectroscopy (FCS) is an analytical method that allows distinguishing different populations of fluorescent probes in solution and provides data on their concentrations and their diffusion coefficients. FCS was used to characterize the interaction of the transcription factor (MEF2A) with its DNA target sequence. The myocyte enhancer factor 2 (MEF2) belongs to the MADS-box family and activates transcription of numerous muscle genes during myogenesis. Measurements were made using TAMRA-labelled oligonucleotide duplexes derived from a wild type (WT) or a mutated MEF2 target gene. Binding of the protein to the WT DNA resulted in significant changes of the diffusion. Specificity of the interaction was confirmed using the mutated DNA. Bound to free probe ratios were determined at different MEF2A concentrations and the apparent equilibrium dissociation constant 
for the full-length MEF2A was estimated. To cite this article: G. Octobre et al., C. R. Biologies 328 (2005).
Résumé |
La spectroscopie à corrélation de fluorescence (FCS) est une méthode qui permet de distinguer en solution plusieurs populations de molécules fluorescentes et dʼestimer leurs concentrations et leurs constantes de diffusion. La FCS a été utilisée pour caractériser lʼinteraction entre un facteur de transcription (MEF2A) et sa séquence cible sur lʼADN. Le facteur de transcription MEF2 Myocyte enhancer factor 2 appartient à la famille des protéines à MADS-box et active la transcription de plusieurs gènes musculaires pendant la myogenèse. Des mesures FCS ont été réalisées sur des oligonucléotides double brin marqués au TAMRA et correspondant à la séquence consensuelle (WT) ou mutée (Mut) du site de liaison ADN/MEF2A. La liaison MEF2A sur son site dʼinteraction (WT) se traduit par un allongement significatif du temps de diffusion. La spécificité de lʼinteraction a été confirmée par lʼutilisation de la séquence mutée (Mut). La FCS a permis dʼévaluer le rapport libre/lié pour plusieurs concentrations de MEF2A et la constante de dissociation apparente 
. Pour citer cet article : G. Octobre et al., C. R. Biologies 328 (2005).
Keywords : DNA-binding, MEF2, MADS box, Fluorescence correlation spectroscopy
Mots-clés : Interaction ADN-protéine, MEF2, MADS box, Spectroscopie à corrélation de fluorescence
Plan
Vol 328 - N° 12
P. 1033-1040 - décembre 2005 Retour au numéro
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- Editorial Board
- Investigation by fluorescence correlation spectroscopy of the chaperoning interactions of HIV-1 nucleocapsid protein with the viral DNA initiation sequences
- Caroline Égelé, Emmanuel Schaub, Étienne Piémont, Hugues de Rocquigny, Yves Mély
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