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Principe de la vitrification : cinétiques comparatives - 01/01/06

Doi : 10.1016/j.gyobfe.2006.07.017 
A. Camus a, , P. Clairaz b, A. Ersham b, A.-L. Van Kappel b, G. Savić a, C. Staub a
a IMV technologies, 10, rue Clemenceau, 61300 L'Aigle, France 
b Cryo Bio System, 29, rue Tronchet, 75008 Paris, France 

Auteur correspondant.

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Résumé

Les dispositifs et protocoles de vitrification des embryons ont évolué ces dernières années pour en améliorer la viabilité et la réimplantation postdécongélation. Leur principal défaut est de ne pas pouvoir garantir la sécurité sanitaire du matériel biologique cryoconservé. Pour pallier ce problème et répondre à la réglementation de l'Union européenne, la société Cryo Bio System a développé un kit de Vitrification Haute Sécurité™ (VHS). Ce kit est constitué d'un ensemble jonc-capillaire avec gouttière introduit dans une paillette de VHS soudée thermiquement avant vitrification. Nous avons confirmé, par l'étude comparée des cinétiques de descente et remontée des températures de cinq dispositifs différents, que le kit VHS associé à un très faible volume de milieu visqueux riche en cryoprotecteur — solution de PBS enrichi à 25 μM de Ficoll 400, 750 mM de saccharose et 1 % d'albumine et (V/V) 20 % de DMSO et 20 % d'éthylène glycol — permettait d'atteindre un état vitreux. Nous avons également montré le rôle protecteur thermique de la paillette de VHS lors des transferts. Après extraction de l'ensemble jonc-capillaire (paillette maintenue partiellement immergée dans l'azote liquide), la gouttière du capillaire est rapidement plongée dans le bain de décongélation à 20 °C. Ce protocole de vitrification a été validé biologiquement par le travail de P. Vanderzwalmen qui a obtenu de bons résultats en utilisant cette méthode avec des embryons humains. Aujourd'hui, le kit de VHS représente l'unique alternative pour la vitrification des embryons, des ovocytes et des fluides biologiques dans le respect des normes sanitaires recommandées par l'Union européenne.

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Abstract

Over the last decade, several methods have been designed to improve the survival rate of vitrificated embryos. Although some teams have succeeded, the main remaining drawback of these methods is that they do not provide a leak proof environment for cryopreserved biological samples. To respond to that demand in respect with the European reglementation, the Cryo Bio System company (CBS) designed the HSV High Security Vitrification Kit™ (HSV). This system is composed of three distinct parts, a High Security thermal-autogenic sealed clear straw, a capillary with its extremity in form of a gutter, and an introducer that can be mounted on the manipulation rod before introduction into the straw. In this study, we confirmed that the CBS vitrification kit is a suitable method for vitrification in association with a small amount of cryoprotector enriched viscous media such as 25 μM Ficool 400, 750 mM Sucrose, 1% Bovine albumin, 20% Dimethyl Sulfoxide and 20% Ethylene glycol in a Phosphate buffered saline solution. We also evaluated the speed of the temperature decrease during vitrification in comparison with four other commercially available non-aseptic methods and showed the protective role of the CBS system during transfer. These physical data have now been confirmed biologically by P. Vanderzwalmen who obtained easily reproductible good results with human embryo using our method. Today, the HSV represents the unique aseptic alternative device (EC and FDA approved) for embryos, oocytes, and biological samples vitrification.

Le texte complet de cet article est disponible en PDF.

Mots clés : Vitrification, Méthode, Kit VHS, Haute sécurité, Température, Cinétique, Embryon, Ovocyte, Cellule germinale, Cryo Bio System

Keywords : Vitrification, Process, HSV kit, High security, Temperature, Kinetic, Embryo, Oocyte, Germ cell, Cryo Bio System


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Vol 34 - N° 9

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