Le phosphatidylethanol (PEth) est un biomarqueur de l’alcool qui est fréquemment utilisé en Suède pour la détection et le suivi de problèmes liés à l’alcool. En comparaison avec d’autres biomarqueurs de l’alcool (comme la GGT et la CDT), le PEth a une meilleure sensibilité, spécificité et corrélation aux rapports de consommation d’alcool. L’analyse de ce composé est généralement effectuée par chromatographie liquide (LC) couplée à un triple quadrupole. Ce travail présente une approche alternative pour la quantification du PEth dans le sang total en utilisant la LC couplée à une détection par spectrométrie de masse haute résolution masse exacte (HRAM).

Les échantillons de sang total sont hémolysés par congélation. Une précipitation de protéines est alors effectuée avec de l’isopropanol contenant l’étalon interne deutéré. Suite à la centrifugation, 1μL de surnageant est injecté dans le système LC-HRAM. La séparation LC se fait en mode isocratique avec une colonne Accucore PhenylHexyl (50×2,1mm 2,6μm). Un rinçage de la colonne est effectué suite à l’élution du PEth, et la durée totale de l’analyse chromatographique est de 3minutes. La détection se fait avec un système Exactive Plus en mode Full Scan en ionisation à polarité négative et avec une résolution de 140 000 (FWHM) pour le rapport m/z=200. La quantification des composés se fait par l’extraction du courant ionique correspondant à la masse exacte de l’analyte, extraite à 3ppm de précision.

La méthode a été caractérisée et une courbe de calibration a été générée entre des concentrations de 0,03μM et 6μM avec une bonne linéarité et une bonne précision. La spécificité de la méthode a été évaluée par l’injection d’échantillons de volontaires n’ayant pas consommé d’alcool pendant les deux semaines précédant le prélèvement. Trois contrôles de qualité ont été utilisés pour déterminer la justesse et la précision de la méthode. Les résultats ont montré une bonne précision et une bonne justesse avec des valeurs de biais et d’écart-type inférieures à 5 % pour les trois niveaux.

Une méthode précise et juste a été développée pour l’analyse de PEth en sang total. La méthode utilisée est rapide et facile à mettre en place avec une simple détection en Full Scan. La sélectivité de la méthode est obtenue grâce à l’utilisation d’une très haute résolution avec une très grande précision en masse. L’utilisation d’une colonne de type core-shell en mode séparation en mode isocratique permet aussi d’avoir une bonne sélectivité ainsi qu’une méthode très rapide. La robustesse de la méthode est assurée par l’injection de très faibles volumes d’échantillon, l’adaptation de paramètres source pour préserver la source d’ionization et des étapes de rinçage du système.