En toxicologie hospitalière, le but est d’identifier et de quantifier des médicaments/drogues inconnus responsables d’intoxications. La fiabilité des résultats de laboratoire ne dépend pas uniquement d’une technique d’analyse robuste, une préparation de l’échantillon dans les règles de l’art doit précéder la phase analytique. Cette phase est appelée préanalytique. Elle implique notamment le choix du moment du prélèvement, le choix du tube adéquat (avec stabilisateur ou autres additifs), et les conditions de conservation optimales jusqu’au moment de l’analyse. En prenant l’exemple de la cocaïne, drogue d’abus largement consommée, responsable d’arrêts cardiaques et/ou de défaillances hépatiques majeures, les données de stabilité dans le prélèvement biologique seront étudiées et discutées.

Différentes conditions de stockage ont été testées : température (ambiante, +4°C et −20°C), avec différents anticoagulants (fluorure de sodium, EDTA, tube sec, héparinate de lithium), à différents temps (→ 48heures), à deux concentrations différentes (75 et 750ng/mL). 200μL de sérum sont mélangés avec 200μL d’une solution méthanolique contenant les étalons internes deutérés dédiés (standards internes à 100ng/mL). Après agitation, le mélange est centrifugé 10min à 4°C (14 000rpm), puis 20μL de surnageant sont injectés dans un système LC Aria TLX-1 (Thermo). L’extraction est réalisée sur une colonne Cyclone MAX (Thermo) et la séparation est réalisée en mode isocratique sur une colonne HSF5 100×4mm (3,5μm) (Supelco) avec un mélange formiate d’ammonium/méthanol ajusté à pH3 à un débit de 0,8mL/min. La détection par spectrométrie de masse est réalisée sur un triple quadripôle TSQ Quantum Ultra (Thermo) en mode Selected Reaction Monitoring (SRM) en electrospray positif. Le temps d’analyse total est de 9minutes. En corolaire du suivi de la dégradation de la cocaïne, l’activité pseudocholinestérase a été suivie (C4000, Siemens).

Dans le plasma, la cocaïne est rapidement hydrolysée en méthylecgonine (MEC) ou benzoylecgonine (BZE). Sous l’action des estérases plasmatiques, la dégradation de la cocaïne se constate également in vitro. Aux deux concentrations testées, la cocaïne est complètement dégradée à température ambiante après 24heures. À 4°C, la dégradation est réduite (<40 % pour des temps inférieurs à 5h). À −20°C, la cocaïne est stable (<20 % à 24h) pour les deux concentrations. MEC et BZE ont également été suivies et sont stables à 24h quelles que soient les conditions. Au contraire des autres anticoagulants, l’adjonction d’un réducteur, comme du fluorure de sodium, permet de diminuer la dégradation de la cocaïne pendant 48h (<20 % à 4°C,<30 % à température ambiante). En effet, l’activité des pseudocholinestérases est inhibée par le fluorure de sodium, ce qui entraîne ainsi une diminution de la dégradation de la cocaïne. Cela s’explique par la diminution de l’activité enzymatique (<30 % par rapport aux autres anticoagulants testés).

La connaissance de la stabilité des médicaments et des drogues dans des matrices biologiques est importante pour l’interprétation des résultats toxicologiques. Des mesures spécifiques de stockage comme une faible température, et de traitement comme l’utilisation d’anticoagulants spécifiques (fluorure de sodium, inhibiteurs de cholinestérases) permettent de diminuer la dégradation des drogues comme la cocaïne et donc de faciliter l’interprétation des résultats par rapport au moment du prélèvement.