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Nutrition clinique et métabolisme
Volume 31, n° 3
page 221 (septembre 2017)
Doi : 10.1016/j.nupar.2017.06.014
Congrès

L’hypoxie augmente la production de citrulline par les entérocytes humains : étude in vitro
 

S. Pestour 1, 2, , M. Couchet 2, C. Breuillard 2, F. Lamarche 2, C. Corne 3, É. Fontaine 2, 4, C. Moinard 2
1 Hépatogastroentérologie, CHU Grenoble-Alpes 
2 Laboratoire de bioénergétique fondamentale et appliquée, université Grenoble-Alpes 
3 Institut de biologie et pathologie 
4 Nutrition artificielle, CHU Grenoble-Alpes, Grenoble, France 

Auteur correspondant.
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Introduction et but de l’étude

Il est maintenant bien établi que la citrulline (CIT) plasmatique est un excellent marqueur de la fonctionnalité intestinale, en particulier chez les patients de réanimation où elle est généralement effondrée [1]. Or, les mécanismes impliqués ne sont pas connus. Nous proposons que l’hypoxie et l’inflammation observées dans ces situations pourraient impacter négativement la production de CIT. L’objectif de cette étude est donc de déterminer, in vitro, si l’hypoxie et l’inflammation ont des effets sur la production de CIT par l’ornithine transcarbamylase (OTC). Ces effets ont été évalués en utilisant un modèle d’incubation d’explant duodénal humain [2]. Le protocole a été approuvé par le comité de protection des personnes du CHU de Grenoble.

Matériel et méthodes

Huit biopsies duodénales ont été prélevées chez des sujets après information et obtention d’un consentement écrit. Les biopsies ont été incubées dans du milieu de culture complet pendant un temps court (6h) ou long (18h) selon quatre conditions : témoin, inflammation (mélange de cytokines : IL-1β, 1μg/L ; TNFα, 20μg/L ; IFNγ, 10μg/L), hypoxie (3 % d’O2 ) et inflammation avec hypoxie. Après mesure de la viabilité cellulaire, les taux de CIT libérée dans le milieu de culture pendant l’incubation ont été dosés par chromatographie d’échange d’ions. Le niveau d’activité de l’OTC a été mesuré par dosage enzymatique et l’expression protéique de cette enzyme par western blot .

Résultats

Les pourcentages de mort cellulaire à l’issue de la période d’incubation ne différaient pas quelles que soient les conditions (Tableau 1). La production intestinale de citrulline était augmentée dans les conditions hypoxie et hypoxie avec inflammation après 6h d’incubation. Ces différences avaient disparu après 18h d’incubation. Cependant, cette augmentation de production de citrulline à 6h ne s’accompagnait ni d’une modification de l’activité ni d’une modification de la quantité de protéine de l’OTC.

Conclusion

La production de citrulline par les entérocytes apparaît augmentée en condition d’hypoxie avec ou sans inflammation sans que cela ne soit expliqué par une modification de l’activité enzymatique ou de l’expression protéique de l’OTC. Les mécanismes précis restent à déterminer.

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