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Gastroentérologie Clinique et Biologique
Vol 29, N° 8-9  - août 2005
p. 900
Doi : GCB-8-9-2005-29-8-0399-8320-101019-200515087
Tumeurs du foie, fibrose

CA1
MODULATION DE LA PROLIFÉRATION CELLULAIRE DANS DES CULTURES DE CELLULES HÉPATIQUES DE RAT PAR LE CHÉLATEUR DU FER O-TRENSOX : UNE RELATION POSSIBLE AVEC LE MÉTABOLISME DES POLYAMINES
 

F Gaboriau [1], C Laupen-Chassay [1], N Pasdeloup [1], JL Pierre [2], P Brissot [1], G Lescoat [1]
[1] INSERM U522, Université de Rennes 1, Equipe Fer et Foie, Etudes Fondamentales et Cliniques, Hôpital Pontchaillou, Rennes
[2] CNRS UMR 5616, Université Joseph Fourier, Equipe de Chimie Biomimétique, Grenoble.

La surcharge en fer augmente l'index mitotique dans des cultures d'hépatocytes de rat stimulées par l'EGF. Le fer, impliqué dans la prolifération tumorale, favorise le développement du carcinome hépatocellulaire en situation de surcharge. Au contraire, la chélation du fer diminue la prolifération cellulaire. Les polyamines jouent aussi un rôle essentiel dans la prolifération cellulaire. Leur effet sur la prolifération serait médié par une interaction avec la protéine p53, qui régule des gènes impliqués dans la prolifération et la mort cellulaire. Le but de la présente étude est : 1) d'analyser l'effet de la déplétion en fer (chélation) et en polyamines sur la prolifération cellulaire ; 2) de vérifier si l'effet de la chélation peut aussi être associé à une modification du métabolisme des polyamines ; 3) d'étudier l'influence de l'apport exogène de polyamines sur la prolifération cellulaire.

Nous avons utilisé trois modèles expérimentaux de rat : la lignée d'hépatome FAO, la lignée épithéliale hépatique (RLEC) et la culture primaire d'hépatocytes stimulés par l'EGF. La chélation du fer et la déplétion en polyamines ont été réalisées respectivement par le chélateur O-trensox et l'alpha-difluorométhyl ornithine (DFMO), inhibiteur de l'ornithine décarboxylase, enzyme clé de la biosynthèse des polyamines. La réplication de l'ADN et la viabilité cellulaire ont été évaluées par incorporation de thymidine et mesure de l'activité succinate déshydrogénase mitochondriale. La cytotoxicité a été quantifiée par la concentration extracellulaire de LDH. La répartition des cellules dans le cycle cellulaire a été analysée par cytométrie de flux. Les polyamines intracellulaires ont été mesurées par spectrométrie de masse après dansylation.

La chélation du fer réalisée par 50 µm de O-trensox diminue la viabilité cellulaire (-40 %) et la réplication de l'ADN (-75 %). L'arrêt dans le cycle cellulaire varie selon le modèle et se fait soit à la phase G0/G1, soit à la phase S. Ces effets sont associés à une élévation de la concentration extracellulaire de LDH. Le traitement des cellules par 20 mM de DFMO diminue la concentration intracellulaire de spermidine (-30 %) sans modifier celle de la spermine ; cet effet est associé à une baisse de la viabilité cellulaire (-25 %), de la réplication de l'ADN (-40 %) et à une faible cytotoxicité. L'effet antiprolifératif de la chélation du fer s'accompagne aussi d'une baisse de la spermidine intracellulaire (-30 %). De plus, l'addition de spermidine au milieu de culture (1 à 3 mM) accroît la réplication de l'ADN et la viabilité cellulaire.

En conclusion, les résultats montrent que la chélation du fer et la déplétion en polyamines diminuent la prolifération cellulaire. L'effet antiprolifératif de la chélation du fer par le O-trensox est plus intense que celui de la déplétion en polyamines et pourrait s'interpréter par un effet double, déplétion en fer et en polyamines.



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