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Nutrition clinique et métabolisme
Volume 21, n° S2
pages 41-42 (novembre 2007)
Doi : 10.1016/S0985-0562(07)78794-0
O021 Méthode simple et rapide pour le dosage simultané des vitamines A et E dans les mélanges polymériques pour nutrition entérale
 

M. Kuhn a, S. Nakib b, J. De Bandt a, L. Cynober a, C. Loi a
a Laboratoire de Biologie de la Nutrition, Faculté de Pharmacie, Hôpital Hôtel-Dieu, AP-HP, Paris, France 
b Service de Biochimie, Hôpital Hôtel-Dieu, AP-HP, Paris, France 

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Introduction et but de l’étude

Dans les mélanges polymériques destinés à la nutrition entérale (MPE), les vitamines liposolubles sont présentes sous forme de différents esters. Le dosage du contenu total en ces vitamines nécessite de les libérer de ces liaisons esters par une première étape de saponification, étape délicate du fait de la sensibilité de ces molécules à l’oxydation.

Les méthodes existantes sont peu sensibles, fastidieuses, coûteuses et peu adaptées à une utilisation en routine. Le but de cette étude a été de développer une méthode simple et rapide pour doser simultanément les vitamines A et E dans les MPE.

Matériel et méthodes

Après optimisation des étapes de saponification et d’extraction, la procédure analytique suivante a été retenue. A 100 μl de MPE (Sondalis® Iso, Nestlé Clinical Nutrition) sont ajoutés 50 |il d’un étalon interne (Tocol 64 |JM). L’échantillon est ensuite déprotéinisé par addition de 900 μl d’éthanol absolu contenant 1 % de pyrogallol (antioxydant) et saponifié par 200 μl d’une solution de KOH (3,6 M) dans un sonicateur (Branson 2210), 30 min à 65°C et sous atmosphère d’azote. Les échantillons sont alors tamponnés par 500 μl de NaH2PO4 (0,2 M, pH 7,8) et une double extraction à l’hexane est réalisée. La séparation et la quantification des vitamines sont réalisées par chromatographie liquide haute performance en phase inverse (colonne DiscoveryTM C8, 25 cm × 4,6 mm, 5 μm) (avec une phase mobile méthanol-acétonitrile-eau 75/15/10, v/v) et une détection spectrophotométrique à deux longueurs d’onde (292 et 325 nm). La linéarité, la répétabilité (n = 10) et la reproductibilité (n = 20 en 4 séries) ont été déterminées et leurs coefficients de variation (CV) ont été calculés.

Résultats

Les temps de rétention des vitamines A et E sont respectivement de 5,7 et 14,1 min.

Les paramètres de validation sont les suivants :
Tableau 1Vit AVit AVit EVit ELinéaritémin : 0,2 μ Mmax : 10,0 μ Mmin : 3,0 μ Mmax : 84,4 μ MRépétabilité4,7 ± 0,2 μ MCV : 4,0 %30,6 ±1,5 μ MCV: 4,9 %Reproductibilité5,2 ± 0,3 μ MCV : 4,7 %27,2 ± 1,4 μ MCV: 5,0 %

 Vit A Vit A Vit E Vit E 
Linéarité min : 0,2 μ M max : 10,0 μ M min : 3,0 μ M max : 84,4 μ M 
Répétabilité 4,7 ± 0,2 μ M CV : 4,0 % 30,6 ±1,5 μ M CV: 4,9 % 
Reproductibilité 5,2 ± 0,3 μ M CV : 4,7 % 27,2 ± 1,4 μ M CV: 5,0 % 

Conclusions

Cette procédure validée est bien adaptée en termes de sensibilité. Elle est simple à réaliser, peu coûteuse et applicable en routine.

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