La culture de cellules épithéliales limbiques est actuellement utilisée pour traiter les insuffisances limbiques. Néanmoins les techniques de cultures utilisées sont variées et la nature exacte des cellules greffées n’est pas connue avec précision. Notre but est d’analyser le type des cellules et d’évaluer l’expression de divers marqueurs par ces cellules en culture.

Des cultures de kératocytes ainsi que des cultures primaires de cellules épithéliales limbiques sont réalisées à partir d’explants limbiques. Les explants sont prélevés sur un greffon cornéen juste après prélèvement post-mortem ou après conservation en organo-culture. Des cornées ayant un endothélium non conforme sont utilisées. Des explants de stroma sont cultivés afin d’obtenir des cultures de kératocytes. Des explants limbiques sont utilisés pour obtenir des cultures primaires de cellules épithéliales. En fin de culture, les cellules dissociées sont caractérisées à l’aide d’anticorps monoclonaux anti-vimentine pour identifier les kératocytes et anti-cytokératine 3 pour identifier les cellules épithéliales cornéennes différenciées.

Les cultures obtenues à partir des explants limbiques et celles obtenues à partir des explants stromaux comportent des populations cellulaires mixtes. La présence simultanée des deux populations cellulaires améliore la croissance cellulaire.

Un effet feeder de cellules fibroblastiques humaines sur la croissance épithéliale semble probable. La nature précise de ces cellules et leur interaction avec les cellules épithéliales cornéennes restent à déterminer.

Il semble difficile d’obtenir de cultures pures de kératocytes et/ou de cellules épithéliales à partir d’explants limbiques.