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Gynécologie Obstétrique & Fertilité
Volume 34, n° 9
pages 746-753 (septembre 2006)
Doi : 10.1016/j.gyobfe.2006.07.024
Received : 17 July 2006 ;  accepted : 26 July 2006
Vitrification du tissu ovarien : cortex et ovaire entier chez la brebis
Ovarian tissue vitrification: cortex and whole ovary in sheep
 

J. Lornage a, b, , B. Courbière a, C. Mazoyer b, V. Odagescu c, A. Baudot c, A. Bordes a, b, M.-T. Poirel d, M. Franck d, B. Salle a, b
a Unité Inserm 418, hôpital Debrousse, 29, rue Soeur-Bouvier, 69322 Lyon cedex 05, France 
b Département de médecine et de biologie de la reproduction et du développement, hôpital Édouard-Herriot, 5, place d'Arsonval, 69437 Lyon cedex 03, France 
c CRTBT, CNRS, BP 166, 38042 Grenoble cedex 09, France 
d Service de zootechnie, école nationale vétérinaire (ENV) de Lyon, 69280 Marcy-l'Étoile, France 

Auteur correspondant.
Résumé
Objectif

Les buts de cette étude étaient d'évaluer une technique de vitrification de cortex et d'ovaires entiers chez la brebis en utilisant deux solutions, VS1 et VS4, et d'étudier leurs propriétés physiques afin d'éviter la formation de glace lors de la vitrification de l'ovaire entier imprégné de la solution de cryoprotecteurs.

Animaux et méthodes

À partir d'agnelles âgées de six mois, les ovaires entiers avec leur pédicule vasculaire étaient prélevés soit à l'abattoir soit à l'école vétérinaire et préparés pour les tests de toxicité et les protocoles de vitrification. La viabilité folliculaire était mesurée par le test d'exclusion au bleu trypan et l'étude histologique. Le cortex d'un hémi-ovaire était stocké dans l'azote liquide. Quatre à six semaines après la première laparotomie, l'ovaire controlatéral était retiré et l'hémi-ovaire vitrifié était suturé. Les propriétés thermiques de la solution cryoprotectrice VS4 (la vitesse critique de refroidissement [Vccr], la température de transition vitreuse [Tg], la température de fin de fusion [Tm]) étaient mesurées par calorimétrie différentielle.

Résultats

Aucune différence significative des pourcentages de viabilité folliculaire et de follicules normaux n'était observée entre les cortex ovariens exposés ou non exposés aux solutions cryoprotectrices. Il n'y avait pas de différence significative avant et après vitrification. Trois gestations ont eu lieu et quatre agneaux sont nés après autogreffe des cortex ovariens. Avec les ovaires entiers, la décroissance du nombre de follicules normaux était plus faible quand les ovaires étaient traités avec VS4 (p =0,04). Il y avait moins d'anomalies nucléaires (p =0,02). La Vccr de VS4 était de 14,3±1,1 °C/min et Tg était de -125,0±0,2 °C. Du fait de la faible imprégnation des cryoprotecteurs dans le cortex ovarien, la Vccr était très élevée et ne permettait pas de vitrifier le cortex ovarien.

Discussion et conclusions

La cryoconservation de cortex ou d'un ovaire entier par vitrification semble être une technique prometteuse en médecine de la reproduction. Les meilleurs résultats histologiques étaient obtenus avec VS4 quand l'ovaire entier était vitrifié.

The full text of this article is available in PDF format.
Abstract
Objective

The aim of this study was to evaluate a cryopreservation technique by vitrification of cortex or whole ovaries in sheep, using two cryoprotectant solutions: VS1 and VS4 and to study their physical properties to avoid ice crystallisation by vitrification of whole sheep ovaries permeated with a cryoprotectant solution.

Animals and methods

From 6-month-old ewes, whole sheep ovaries with their vascular pedicles were collected at the slaughterhouse or at the veterinary school and prepared for cryoprotectant toxicity tests and freezing procedure. Follicle viability was measured by trypan blue test and histological examination of ovary. The hemi-ovarian cortex was stored in liquid nitrogen. Four to six weeks after the first laparotomy, the controlateral ovary was removed and the vitrified-warmed hemi-ovary was sutured. Thermal properties of a cryoprotectant solution called VS4 (critical cooling rates [Vccr], vitreous transition temperature [Tg], end of melting temperature [Tm]) were measured by differential scanning calorimetry.

Results

No significant difference in follicle viability or normal follicle rates was observed between ovarian cortex exposed or non-exposed to cryoprotectant solutions. Nor was any significant difference observed before and after vitrification. Three pregnancies occurred, from which four lambs were born after autografts of vitrified ovarian cortex. With whole ovary, the decrease in the number of normal follicles was lower when frozen-thawed ovaries were treated with VS4 (P =0.04). There were less nuclear anomalies (P =0.02). The Vccr of VS4 has been estimated to be 14.3±1.1 °C/min and Tg was -125.0±0.2 °C. Because the penetration of cryoprotectants was very low, Vccr was very high and the cooling speed did not allow cortex to vitrify.

Discussion et conclusions

Cryopreservation of cortex or whole ovary by vitrification seems a promising technique in reproductive medicine. The best histologic results were obtained with the VS4 cryoprotectant when whole ovary was vitrified.

The full text of this article is available in PDF format.

Mots clés : Vitrification, Cortex ovarien, Ovaire entier, Autogreffe, Vitesse critique de refroidissement, Brebis

Keywords : Vitrification, Ovarian cortex, Whole ovary, Autograft, Critical cooling rate, Sheep




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