Aspergillus tubingensis and Aspergillus niger as the dominant black Aspergillus, use of simple PCR-RFLP for preliminary differentiation - 20/03/16
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This work aimed to identify the species distribution of common clinical and environmental isolates of black Aspergilli based on simple restriction fragment length polymorphism (RFLP) analysis of the β-tubulin gene. A total of 149 clinical and environmental strains of black Aspergilli were collected and subjected to preliminary morphological examination. Total genomic DNAs were extracted, and PCR was performed to amplify part of the β-tubulin gene. At first, 52 randomly selected samples were species-delineated by sequence analysis. In order to distinguish the most common species, PCR amplicons of 117 black Aspergillus strains were identified by simple PCR-RFLP analysis using the enzyme TasI. Among 52 sequenced isolates, 28 were Aspergillus tubingensis, 21 Aspergillus niger, and the three remaining isolates included Aspergillus uvarum, Aspergillus awamori, and Aspergillus acidus. All 100 environmental and 17 BAL samples subjected to TasI-RFLP analysis of the β-tubulin gene, fell into two groups, consisting of about 59% (n=69) A. tubingensis and 41% (n=48) A. niger. Therefore, the method successfully and rapidly distinguished A. tubingensis and A. niger as the most common species among the clinical and environmental isolates. Although tardy, the Ehrlich test was also able to differentiate A. tubingensis and A. niger according to the yellow color reaction specific to A. niger. A. tubingensis and A. niger are the most common black Aspergillus in both clinical and environmental isolates in Iran. PCR-RFLP using TasI digestion of β-tubulin DNA enables rapid screening for these common species.
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Ce travail avait pour but d’identifier la répartition des espèces des isolats cliniques et environnementaux communs d’Aspergillus noirs en se basant sur le simple polymorphisme de longueur des fragments de restriction (RFLP) du gène de la β-tubuline. Un total de 149 souches cliniques et environnementales d’Aspergillus noirs ont été prélevées et soumises à l’examen morphologique préliminaire. L’ADN génomique total a été extrait et une PCR a été réalisée pour amplifier une partie du gène de la β-tubuline. Dans un premier temps, 52 échantillons choisis au hasard ont été identifiés en espèces par analyse de séquence. Afin de distinguer les espèces les plus communes, des amplicons de 117 souches d’Aspergillus noirs ont été identifiés par simple analyse PCR-RFLP en utilisant l’enzyme TasI. Parmi 52 isolats séquencés, 28 étaient Aspergillus tubingensis, 21 Aspergillus niger, et les trois isolats restants étaient : Aspergillus uvarum, Aspergillus awamori, et Aspergillus acidus. Tous les 100 échantillons de l’environnement et les 17 LBA soumis à l’analyse TasI-RFLP du gène de la β-tubuline se sont retrouvés en deux groupes, composés pour 59 % (n=69) de A. tubingensis et 41 % (n=48) de A. niger. Ainsi la méthode rapide distingue avec succès A. tubingensis et A. niger, espèces les plus communes chez les isolats cliniques et environnementaux. Bien que plus ancien, le test d’Ehrlich a également été en mesure de différencier A. tubingensis et A. niger selon la réaction de couleur jaune spécifique à A. niger. A. tubingensis et A. niger sont les Aspergillus noirs les plus communs dans les isolats cliniques et environnementaux en Iran. Une PCR-RFLP utilisant TasI avec digestion de l’ADN de la β-tubuline permet un dépistage rapide pour ces espèces communes.
El texto completo de este artículo está disponible en PDF.Keywords : Black Aspergillus, Aspergillus niger, Aspergillus tubingensis, β-tubulin, PCR-RFLP, Iran
Mots clés : Aspergillus noir, Aspergillus niger, Aspergillus tubingensis, β-tubuline, PCR-RFLP, Iran
Esquema
Vol 26 - N° 1
P. 9-16 - mars 2016 Regresar al númeroBienvenido a EM-consulte, la referencia de los profesionales de la salud.
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