Certain diagnosis of invasive aspergillosis (IA) is difficult. This disease, whichrequires an early diagnosis and treatment for the best outcome and prognosis, seems toconstitute a good diagnostic application of PCR. Moreover, this new molecular biologytechnique has already been applied to the diagnosis of parasitic and fungal infections(toxoplasmosis, Pneumocystis carinii pneumonia).

The objectives of this review are to assess the different techniques of PCR developedfor the detection of Aspergillus spp. DNA during the invasive process and todiscuss the results of the methods used in clinical applications.

The different PCR techniques which have been described can be split into two types ofprocedures. The first one uses specific primers of A. fumigatus or Aspergillus spp.,and hybridization confirms the specificity; in the second, the fungal DNA is detected byuniversal fungal primers. Then the genus or species of Aspergillus is identified byspecies-specific hybridization. The sensitivity and specificity of these differenttechniques are generally correct. Three authors have evaluated their PCR techniques insamples from an experimental mouse model of IA. The correlation rate between cultureand/or histology of pulmonary samples and PCR was between 83 % and 93 %.

The seven PCR techniques detailed here are most often carried out on biological samplescollected from clinical studies. Among these, four have been adapted to detect Aspergillus DNA in bronchoscopic fluids (bronchoalveolar lavage), two are used on serum and the lastone is used on blood (allowing the detection of Aspergillus DNA and also the DNAfrom other fungi).

Among the bronchoscopic samples, many false positive results have been observed,probably due to the presence of conidies in the patients' airways. The PCR performed onserum or blood allows better specificity (with a lower sensitivity on serum).

This review allows us to conclude that today none of these PCR techniques can easily beperformed in all microbiological laboratories for the diagnosis of IA. The choice ofsample is a deciding factor and only PCR performed on blood samples seems to combinesatisfactory sensitivity and specificity. Finally, simplification and standardisation ofthe methods will be necessary to develop Aspergillus -PCR to meet the urgent demandof physicians.

Le diagnostic de certitude de l'aspergillose invasive (AI) reste difficile. Cettemaladie dont le diagnostic et le traitement précoces conditionnent en partie le pronosticsemble constituer une bonne application diagnostique de la PCR. De plus, cette techniquede biologie moléculaire a déjà trouvé sa place dans le diagnostic d'autres maladiesparasitaires et fongiques (toxoplasmose, pneumocystose).

Les objectifs de cette revue ont été de faire la synthèse des différentestechniques de PCR développées jusqu'à présent pour détecter l'ADN d' Aspergillus spp. au cours de processus invasifs et de discuter les performances des méthodesutilisées lors d'applications cliniques.

Les différentes techniques PCR décrites s'intègrent dans deux types de démarche. Lapremière consiste à utiliser des amorces spécifiques d' Aspergillus spp. ou d' A.fumigatus, la spécificité étant confirmée par hybridation ; dans la seconde,l'ADN fongique est détecté par des primers universels puis une hybridation par sondesspécifiques permet l'identification de genre ou de l'espèce aspergillaire. Lasensibilité et la spécificité de ces techniques sont généralement bonnes. Troisauteurs ont validé leurs techniques sur un modèle murin d'AI. Le taux de corrélationentre la culture et/ou l'examen histologique de prélèvements pulmonaires et la PCR sesitue entre 83 % et 93 %.

Nous avons principalement détaillé les techniques de PCR (au nombre de sept) les plussouvent appliquées à des prélèvements biologiques dans le cadre d'études cliniques.Parmi celles-ci, quatre ont été adaptées à la détection d'ADN dans des liquides defibroscopie (lavage broncho-alvéolaire principalement), deux techniques PCR sontréalisées à partir du sérum et une autre permet la mise en évidence d'ADN d' Aspergillus (mais aussi celui d'autres champignons) dans le sang total.

A partir des prélèvements fibroscopiques, il existe de nombreux faux positifs,probablement dus à la présence dans le tractus respiratoire de spores aspergillaires. LaPCR réalisée à partir du sérum ou du sang total permet d'obtenir une meilleurespécificité (sensibilité un peu plus faible dans le sérum).

En conclusion, aucune des techniques PCR n'est aujourd'hui applicable en routine audiagnostic biologique de l'AI. Le choix du prélèvement est déterminant et seule la PCRréalisée sur des prélèvements sanguins semble associer une sensibilité et unespécificité suffisantes. Enfin, la simplification des méthodes et leur standardisationseront nécessaires au développement de la PCR- Aspergillus comme nouvelledémarche diagnostique de l'AI, pour répondre à la demande de plus en plus pressante descliniciens.