Les levures du genre Candida sont responsables dans plus de 80 % des infections à levures ; parmi celles-ci, Candida albicans est l'espèce la plus souvent impliquée. Au cours des candidoses, les macrophages sont une des premières barrières de défense de l'hôte. La phagocytose constitue alors un mécanisme clé dans l'élimination des levures du genre Candida . Lors de la phagocytose, l'internalisation des levures dans le phagosome aboutit à la fusion de ce compartiment avec les lysosomes pour former le phagolysosome. Le contenu phagolysosomial joue un rôle important dans le processus de fongicidie, son pH d'environ 5 permet une activation optimale des enzymes lysosomiales et conduit, en général, à la destruction des levures ingérées.

Compte tenu de l'implication des lysosomes dans le processus d'élimination des levures et de la capacité de certaines souches à se reproduire, filamenter et survivre dans les phagolysosomes, nous avons étudié l'incidence de l'environnement lysosomial sur la prolifération et la filamentation de C. albicans comparativement à diverses espèces de levures.

Dans cette étude, 2 souches de Candida albicans (sérotype A et B), diverses souches de Candida ( C. glabrata , C. parapsilosis , C. dubliniensis ) et 1 souche de Saccharomyces cerevisiae sont choisies pour leur caractère plus ou moins pathogène et leur capacité ou non à former des filaments. Les études de prolifération et de filamentation sont d'abord réalisées dans des milieux synthétiques (Sabouraud chloramphénicol et RPMI) tamponnés à pH 4 et enrichis en sérum de veau foetal 10 %. La purification des lysosomes permet ensuite d'étudier le comportement des levures dans un environnement semblable à celui du phagosome et de séparer les effets des enzymes lysosomiales de ceux du pH. Enfin, les expériences de phagocytose proprement dites sont réalisées avec des cellules E-clone (lignée macrophagique murine) traitées ou non par bafilomycine. La bafilomycine est un antibiotique qui inhibe spécifiquement les pompes à proton-ATPases des vacuoles lysosomiales, empêchant ainsi l'acidification et donc l'activation des enzymes lysosomiales catabolisantes.

Les expériences en milieu liquide (Sabouraud chloramphénicol et RPMI) montrent que le pH acide stimule la prolifération de la majorité des souches mais inhibe leur filamentation. En milieu lysosomial, seul C. albicans B est significativement sensible aux effets des enzymes, car il présente une augmentation de sa prolifération et de sa filamentation respectivement de 33 et 40 %. Les macrophages traités par bafilomycine ont une fongicidie plus marquée pour les souches de C. albicans A et B et de C. dubliniensis .

Cette étude montre l'importance du contenu lysosomial pour la filamentation de C. albicans B dans les macrophages et donc sa survie après phagocytose. Ainsi la filamentation induite par les enzymes lysosomiales serait un mécanisme d'échappement des levures aux macrophages.

Candida species were involved in more than 80% of all yeast infections. In candidiasis, macrophages are one of the host's first defense barriers and phagocytosis plays an essential role in eliminating Candida . After phagocytosis, yeast were found in phagolysosomes subsequent to fusion of the lysosomes with phagosomes. Phagolysosomal content plays an important role in the killing process; its acidic pH allows optimal activation of lysosomal enzymes and in general, leads to the degradation of ingested yeast.

Considering the lysosome implication in the degradation process of yeast and the ability of some yeast to grow, to form filaments and to survive in phagosomes, we studied the effect of the lysosomal environment environment on Candida albicans growth and germ tube formation.

In this study, several Candida species ( C. albicans serotypes A and B, C. glabrata , C. parapsilosis , C. dubliniensis ) and Saccharomyces cerevisiae were chosen for their possible pathogenicity and ability to form or not filaments. Yeast growth and germ tube formation experiments were performed in synthetic medium (Sabouraud chloramphenicol and RPMI) adjusted to pH 4 and supplemented with fetal calf serum (10%). Lysosome purification was used to study yeast behavior in an environment similar to that of phagosomes and to separate the pH effects from those of the lysosomal enzymes.

The phagocytosis experiments were performed with E-clone cells (murine macrophage cell line) treated or not with bafilomycin, an antibiotic which specifically inhibits lysosomal vacuoles proton-ATPase pumps. Bafilomycin treatment inhibits phagosome acidification, and thus impairs activation of lysosomal enzymes.

Experiments in liquid medium (Sabouraud chloramphenicol and RPMI) showed that acidic pH stimulated proliferation of some yeast species, but inhibits formation of hyphal germ tubes. In lysosomal medium, C. albicans B was significantly sensitive to the enzyme effects, displaying a proliferation and filamentous form increasing of 33 and 40% respectively. Conversely, macrophages treated with bafilomycin and infected by C. albicans A and B and by C. dubliniensis had a more pronounced fungicidal effect.

This study shows the importance of lysosomal content for C. albicans serotype B filament formation in macrophage, and so, its survival after phagocytosis. Germ tube formation induced by lysosomal enzymes would be an escape mechanism for the yeast after phagocytosis.