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Isolation and purification of the immunodominant antigen P61 from Nocardia brasiliensis culture filtrate - 04/03/08

Doi : JMM-09-2003-13-3-1156-5233-101019-ART1 

M.C. Salinas-Carmona,

L.I. Pérez-Rivera,

E. Torres-López

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Resumen

Isolement et purification de l'antigène immunodominant P61 à partir du filtrat de culture de N. brasiliensis

Objectifs

L'objet de cette étude a été de comparer la pureté de la catalase P61, obtenue à partir de deux sources : filtrat de culture et cellules bactériennes.

Matériel et Méthodes

Des cultures de N. brasiliensis ATCC-7000358 ont été utilisées pour isoler la protéine P61. Le filtrat de culture a été additionné avec 50 % de sulfate d'ammonium à 4 ºC. Après centrifugation, le précipité a été largement dialysé et lyophilisé.

Après électrophorèse des protéines en gel de polyacrylamide à 12 % en présence de SDS, la P61 a été finalement purifiée par élution de la bande correspondante. La pureté de P61 a été analysée en gradient 8-18 % de SDS PAGE.

Résultats

La fraction P61 isolée du filtrat de culture est plus pure que celle obtenue à partir des cellules, mais sa concentration est inférieure. Nous avons confirmé l'activité catalasique de la protéine purifiée et avons suivi la cinétique de son apparition dans le milieu de culture.

Conclusion

L'antigène immunodominant P61 de N. brasiliensis est présent dans le filtrat de culture et peut être purifié avec un meilleur rendement. Il possède une activité catalasique élevée.

Abstract

Objectives

The aim of this study was to compare the purity of P61 (catalase) obtained from two sources: bacterial cell and its culture filtrate.

Material and Methods

Batch cultures of Nocardia brasiliensis ATCC-700358 strain were used to isolate P61 protein. Culture filtrate was mixed with 50% saturation ammonium sulphate solution at 4 °C. After centrifugation, the precipitate was dialyzed extensively and lyophilized. Proteins were isolated in preparative 12% SDS polyacrylamide gels. P61 was eluted from preparative gels by mechanical extraction with water.

Results

While P61 isolated from culture filtrate was pure compared with that obtained from bacterial cell extract, its yield was lower. We confirmed the presence of catalase activity in purified protein and demonstrated its kinetics in culture media.

Conclusion

The immunodominant antigen P61 from N. brasiliensis is present in the culture filtrate. Its purity is higher that of the bacterial cell and has catalase activity.


Mots clés : Isolement , Purification , Nocardia brasiliensis , Antigène immunodominante , Catalase

Keywords: Isolation , Purification , Nocardia brasiliensis , Antigen immunodominant , Catalase


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Vol 13 - N° 3

P. 117-121 - septembre 2003 Regresar al número
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