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Evaluation of flow cytometry to investigate oxidative response of human leukocytes to Aspergillus fumigatus - 04/03/08

Doi : JMM-09-2003-13-3-1156-5233-101019-ART3 

A. Pastor [1],

J. Boutonnat [2],

P. Ambroise-Thomas [1],

R. Grillot [1],

D. Aldebert [1]

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Resumen

Evaluation de la cytométrie en flux pour étudier la réponse oxydative des leucocytes à Aspegillus fumigatus

Objectifs

Un test de cytométrie en flux a été développé pour analyser la réponse oxydative des granulocytes et monocytes humains à Aspergillus fumigatus . Le pourcentage de cellules productrices de radicaux oxygénés et l'intensité moyenne de la réponse oxydative des cellules sont quantifiés par cette technique.

Matériel et méthodes

Ce test peut être réalisé sur 200 microlitres de sang total et en 75 minutes. Les leucocytes sont stimulés 15 minutes par 10 7 conidies tuées et la dihydrorhodamine 123 est utilisée pour détecter la réponse oxydative.

Résultats

Cette méthode est reproductible. Les coefficients de variation sont de 7 % et 4 % pour le pourcentage de granulocytes et monocytes stimulés et de 7 % et 11 % pour l'intensité de la réponse. Cependant une importante variabilité de la réponse oxidative à A. fumigatus a été observée chez les sujets sains, l'intervalle de réponse oxidative à A. fumigatus étant de 21-100 % pour les monocytes et de 60-100 % pour les granulocytes.

Abstract

Objectives

A flow cytometry method was developed to analyze the oxidative response of human granulocytes and monocytes to A. fumigatus stimulation. The percentage of cells producing reactive oxygen species and the mean intensity response of cells were determined by flow cytometry.

Material and methods

Only two hundred microliters of whole blood was used and the results were obtained in 75 minutes. The leukocytes were stimulated with 10 7 killed conidia 15 min at 37 °C and dihydrorhodamine 123 was used to detect the oxidative response.

Results

The method was reproducible. The coefficient of variation was 7% and 4% for the percentage of stimulated-granulocytes and -monocytes and 7% and 11% for the intensity of response. Nevertheless, an important variability of oxidative response to A. fumigatus was observed with cells of healthy subjects. The range of oxidizing monocytes and granulocytes after stimulation with A. fumigatus was 21-100% and 60-100% respectively.


Mots clés : Aspergillus fumigatus , Leucocytes , Réponse oxidative , Cytométrie en flux , Sang total

Keywords: Aspergillus fumigatus , Leukocytes , Oxidative response , Flow cytometry , Whole blood


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Vol 13 - N° 3

P. 129-132 - septembre 2003 Regresar al número
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