Le purpura thrombotique thrombocytopénique (PTT) est une maladie auto-immune rare et grave caractérisée par la présence d’anticorps dirigés contre ADAMTS13. L’implication des lymphocytes T CD4+ spécifiques d’ADAMTS13, dans la physiopathologie de la maladie est suggérée par une restriction pour l’haplotype HLA-DRB11*1 (DR11) et l’isotype IgG des anticorps. Cependant, la réponse T auto-immune anti-ADAMTS13 n’a jamais été étudiée. Dans ce travail, nous avons identifié les épitopes T immunodominants d’ADAMTS13.

À l’aide de l’algorythme de prédiction du site web www.iedb.org/, nous avons sélectionné in silico les peptides d’ADAMTS13 susceptibles d’être présentés par les molécules HLA-DR11. Ensuite, l’étude de la liaison de ces peptides à des molécules HLA-DR11 par des tests Elisa compétitifs a permis d’identifier les peptides les plus affins. Enfin, nous avons déterminé les peptides d’ADAMTS13 reconnus par les lymphocytes T CD4+ de donneurs sains et de patients porteurs de l’haplotype DR11, au diagnostic de leur maladie ou en rémission. Pour cela, nous avons stimulé de manière répétée les lymphocytes T CD4+ circulants par des cellules dendritiques chargées avec ces peptides, afin de générer des lignées cellulaires après amplification des cellules sécrétant de l’interféron gamma sous stimulation. Ensuite, l’effet de chaque peptide individuel sur les lignées obtenues a été évalué par test ELISPOT de sécrétion d’interféron gamma. Nous avons ensuite déterminé si les peptides identifiés pour l’haplotype HLA-DR11 étaient partagés par d’autres haplotypes, en particulier HLA-DR1. Enfin, nous avons déterminé si ces peptides étaient impliqués dans une réponse immunitaire in vivo chez un modèle murin de souris transgénique humanisée exprimant l’haplotype HLA-DR1, immunisée par de l’ADAMTS13 humaine recombinante.

Une première liste de 48 peptides affins pour HLA-DR11 fut établie par l’analyse IEDB. Parmi ces peptides, seuls dix-neuf ont montré une capacité de fixation significative aux molécules HLA-DR11, lors des tests Elisa compétitifs. Ces 19 peptides ont alors permis de générer des lignées cellulaires T CD4+ issues de patients et de donneurs sains HLA-DR11 (n=11). Six peptides issus d’ADAMTS13 étaient capables d’activer les lignées T CD4+ lors des tests ELISPOT interféron gamma. Ces peptides sont localisés dans différents domaines de la protéine, en particulier dans les domaines spacer et CUB2. De façon intéressante, deux de ces peptides étaient également retrouvés chez des patients DR1. De plus, l’immunisation de souris transgéniques humanisées DR1, par la protéine ADAMTS13 recombinante humaine, nous a permis de générer des hybridomes T CD4+ spécifiques d’ADAMTS13 et seul un de ces peptides était capable d’induire une stimulation des hybridomes obtenus. La séquence de ce peptide a été définie plus précisément, il est situé dans le domaine CUB2 et représente l’épitope T immunodominant d’ADAMTS13.

Nous avons donc identifié plusieurs épitopes T d’A13 chez des patients DR11, dont un localisé dans le domaine CUB2 apparaît être immunodominant. Cela nous permet d’envisager l’isolation et la caractérisation des lymphocytes T CD4+ spécifiques d’ADAMTS13 impliqués dans la survenue de la maladie et potentiellement prédictifs de rechute chez les patients en rémission.