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Le tofacitinib a un impact sur les fonctions du lymphocyte B in vitro et in vivo - 30/11/20

Doi : 10.1016/j.rhum.2020.10.068 
G. Decarriere 1, , J. Mielle 2, B. Combe 1, J. Morel 1, R. Audo 2, C. Daien 1
1 Département de rhumatologie, CHU et université de Montpellier, Montpellier 
2 Institut de génétique moléculaire de Montpellier, UMR5535, Montpellier 

Auteur correspondant.

Resumen

Introduction

Le tofacitinib (tofa) inhibe la signalisation des cytokines activées par JAK1 et JAK3. Cela conduit à une diminution des lymphocytes Th17 et une augmentation des lymphocytes T (LT) régulateurs. Les effets du tofa sur les lymphocytes B (LB) régulateurs (Bregs) ont été moins étudiés que ceux sur les LT. L’objectif principal de ce travail était donc d’étudier l’effet du tofa sur le profil cytokinique des LB (Bregs et LB producteurs de cytokines pro-inflammatoires) in vitro en réponse à différents stimuli JAK-dépendant et indépendants L’objectif secondaire était de déterminer l’effet du tofa sur la différenciation plasmocytaire et mémoire des LB in vitro. L’effet du tofa in vivo sur la production cytokinique des LB a également été évalué chez la souris.

Matériels et méthodes

Les LB isolés ont été mis en culture in vitro pendant 4 à 8jours en l’absence ou présence de doses croissantes de tofa (1μM, 0,1μM, 0,01μM), et de différentes stimulations B : stimuli JAK-STAT dépendants (IL-2 et IL-21) et stimuli JAK-STAT indépendants (CpG, un ligand du TLR9). Les cytokines ont été mesurées par cytométrie en flux et par ELISA. Une cinétique d’activation de la voie JAK/STAT et de phospho-p38 a été réalisée à 30min, 120min et 240min par Western Blot. Secondairement, des inhibiteurs d’IL-10, IL-6 et IL-21 ont été ajoutés aux cultures. In vivo, les souris ont été traitées par tofa ou placebo pendant 8jours, puis les LB inguinaux et péritonéaux ont été analysés.

Résultats

En présence d’un stimuli JAK-STAT dépendants IL-2/IL-21 (n=7), le tofa entraînait une diminution de sécrétion de cytokines pro inflammatoires : IL-6 (2,7 %[1,0-7,6] pour le tofa versus 8,9 %[7,1-18,1], p=0,01) et IFN-γ (ELISA uniquement) et de cytokines anti inflammatoires : IL-10 (0,77 %[0,46-1,37] versus 2,6 %[0,65-3,3], p=0,04), IL-35 (Mean Fluorescence Intensity [MFI] =89,5[56,1-99,6] pour le tofa versus 163[125-239], p=0,01) par les LB de contrôles. En présence d’un stimuli JAK-STAT indépendants CpG (n=9), on observait également une diminution d’IL-10 (1,9 % [0,6-2,5] pour le tofa versus 2,5 %[0,91-5,1], p=0,02), IL-35 (MFI : 129,4[85,2-354,6] versus 177,7[132,5-566,8], p=0,001), IL-6 (30,2 %[20,4-48,2] versus 35,5 %[27,3-59,0], p=0,05) et d’IFN-γ (ELISA). Contrairement à la stimulation JAK/STAT dépendante qui activait très rapidement la voie JAK/STAT, la stimulation du TLR9 (CpG) activait la voie JAK/STAT de façon retardée à 2-4h, suggérant que les cytokines produites en réponse au CpG pouvaient activer secondairement la voie JAK/STAT par un effet autocrine pouvant être bloqué par le tofa. En présence d’anticorps bloquant l’IL-10, la diminution de l’effet du CpG et du tofa sur l’IL-6 et de l’IL10 semblait confirmer cette hypothèse. Le tofa inhibait la différenciation plasmocytaire en présence d’IL-2 et/ou IL-21(0,09 % [0,05-0,17] versus 2,4 %[1,4-3,3], n=6, p=0,03), mais pas en présence de CpG (3,27 %[0,57-4,97] versus 3,94 %[0,73-8,41], n=6, p=0,15). In vivo, le tofa diminuait la sécrétion d’IL-35 par les LB (0,76 % [0,42-0,97] pour le tofa versus 1,63 % [0,74-2,44 ; p=0,05]) dans le liquide péritonéal, mais pas d’IL-10 ni d’IL-35.

Conclusion

Le tofa, dans des conditions de stimulations des voies JAK/STAT dépendantes ou indépendantes de celles-ci, a un impact in vitro et in vivo sur les sécrétions cytokiniques d’IL-10, IL-35, IL-6 et IFN-γ des LB. En empêchant la signalisation de l’IL-10, le tofacitinib interrompt la boucle d’amplification autocrine et diminue donc secondairement la sécrétion d’IL-10 et l’IL-6. L’effet du tofa sur les B10+ semble moindre chez la souris in vivo. Enfin, le tofa peut diminuer la différentiation plasmocytaire T-dépendante.

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