Évaluer un protocole de transparisation utilisant l’éthyle cinnamate, produit organique non toxique pour l’homme, et son intérêt dans l’étude par microscopie à feuille de lumière des dommages cochléaires post-implantatoires chez la gerbille de Mongolie.

Les animaux bénéficiaient d’une implantation cochléaire droite en fenêtre ronde par voie rétro-auriculaire. Ils étaient ensuite euthanasiés 10 semaines après l’implantation. Les cochlées étaient préparées (porte électrodes en place) selon un protocole de 29 jours comprenant des étapes de fixation, microdissection, décalcification, perméabilisation, blocage, immunomarquage fluorescent, déshydratation et enfin transparisation en solution d’éthyle cinnamate. L’acquisition était effectuée en microscopie à feuille de lumière. Le logiciel Imaris était ensuite utilisé pour l’analyse tridimensionnelle.

Les cochlées transparentes n’avaient pas subi de modification architecturale notable. Six cochlées étaient acquises en microscopie à feuille de lumière permettant une bonne visibilité de la cochlée entière. L’analyse tridimensionnelle en immunofluorescence de la cochlée permettait de mettre en évidence une résolution d’image suffisante pour l’analyse des cellules neuronales du ganglion spiral et l’évaluation de la réaction tissulaire fibrotique entourant le porte électrodes.

Le protocole de transparisation par l’éthyle cinnamate était performant pour l’analyse en microscopie à feuille de lumière de la cochlée entière de gerbille de Mongolie avec l’implant laissé in situ. Cette technique était adaptée à l’étude dans un même échantillon, des dommages cellulaires et tissulaires post-implantatoires, sans présenter la toxicité des autres méthodes décrites à ce jour.