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In vitro and in vivo cell surface expression of a thiol-specific antioxidant-like protein in Candida albicans - 01/01/05

Doi : 10.1016/j.mycmed.2004.12.001 
V. Apaire-Marchais , J. Cottin, A. Marot-Leblond, C. Lefrançois, G. Tronchin, R. Robert
Groupe d'Etude des Interactions Hôte-Parasite, UPRES-EA 3142, UFR des Sciences Pharmaceutiques et d'Ingénierie de la Santé, 16 Bd Daviers, 49045 Angers cédex, France 

*Corresponding author.

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Abstract

Objective. - Among potential virulence factors of Candida albicans, are hydrophobic hyphal surface proteins.

Methods. - A cDNA library was therefore constructed from germ tube mRNAs, and immunoscreened with a rabbit immune serum raised against purified hydrophobic hyphal proteins.

Results. - Analysis of the nucleotide and deduced amino acid sequences of one selected clone revealed an open reading frame encoding a protein of 196 amino acid residues with a molecular mass of 25-kDa. Significant homology was shown with a class of thiol-specific antioxidant (Tsa) like enzymes present in prokaryotes and eukaryotes. A 73% identity was obtained with Saccharomyces cerevisiae Tsa1p. Reverse transcription-quantitative PCR showed the expression of C. albicans TSA-like gene in both blastoconidia and germ tubes, with a 15-fold overexpression in germ tubes. However, in vitro studies using anti-peptide antibodies and confocal microscopy demonstrated the presence of the corresponding protein at the surface of the hyphal part of germ tubes exclusively.

Conclusion. - In conclusion, this protein which was synthesized in both blastoconidia and germ tubes, was expressed at the surface of the invasive forms in vitro, but also in vivo in a murine model. Therefore, it could play a role in pathogenesis of C. albicans.

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Résumé

Objectif. - Les protéines hyphales hydrophobes de surface comptent parmi les facteurs de virulence potentiels de Candida albicans.

Méthodes. - Ainsi, une banque d'ADNc a été construite à partir d'ARNm de tubes germinatifs, et immunocriblée avec un immunsérum de lapin dirigé contre les protéines hyphales hydrophobes purifiées.

Résultats. - L'analyse de la séquence nucléotidique et de la séquence d'acides aminés déduite de l'un des clones sélectionné a révélé un cadre ouvert de lecture codant une protéine de 196 acides aminés ayant une masse moléculaire de 25 kDa. Une homologie significative de cette séquence a été montrée avec les séquences d'une classe d'enzymes antioxydantes, thiol-spécifiques, présentes chez les procaryotes et les eucaryotes. Une identité de 73% a été obtenue avec la protéine Tsa1 de Saccharomyces cerevisiae. La RT-PCR quantitative a montré l'expression du gène TSA-like de C. albicans à la fois pour la forme blastospore et pour la forme tube germinatif, avec une sur-expression de 15 fois pour ces tubes germinatifs. Des études complémentaires in vitro, utilisant des anticorps anti-peptides et la microscopie confocale, ont démontré la présence de la protéine correspondante exclusivement à la surface de la partie hyphale des tubes germinatifs.

Conclusion. - En conclusion, nous avons révélé que cette protéine Tsa-like de C. albicans était synthétisée à la fois par les blastospores et les tubes germinatifs et qu'elle était exprimée à la surface des formes invasives in vitro, mais aussi in vivo dans un modèle murin. Elle pourrait donc jouer un rôle dans la pathogénicité de C. albicans.

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Keywords : Candida albicans, Germ tubes, cDNA, Tsa-like protein, Hydrophobic surface proteins

Mots clés : Candida albicans, Tubes germinatifs, ADNc, Protéine Tsa-like, Protéines hydrophobes de surface


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Vol 15 - N° 1

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