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Bacillus subtilis inhibits growth of Cladophialophora carrionii in vitro - 01/01/06

Doi : 10.1016/j.mycmed.2006.01.007 
H. Romero a, , L. Viscaya b, G. Ferrara a
a Cátedra de Micología, Escuela de Bioanálisis, Facultad de Medicina, Universidad Central de Venezuela, Caracas, Venezuela 
b Departamento de Microbiología y Parasitología, Escuela de Bioanálisis, Facultad de Farmacia y Bioanálisis, Universidad de los Andes, Mérida, Venezuela 

Corresponding author. Av. La Colina, Res. Rey Arturo. Apto. 1-C. Los Chaguaramos, Caracas, Venezuela. Tel.: +582 6 62 7294.

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Abstract

The antifungal activity of Bacillus subtilis against a strain of Cladophialophora carrionii was evaluated using plate diffusion (PD) and sealed plate (SP) methods. For the PD test, the inoculum was obtained by homogenizing the log-phase fungus, adjusted to 0.5 McFarland and seeded (0.5 ml) on Sabouraud dextrose agar (SDA) plates; the B. subtilis extract was prepared from an 8-day culture, whose supernatant was lyophilized, concentrated 10 × and distributed (40 μl) in 4-mm holes previously punched in the seeded SDA plates. The plates were incubated at 30 °C for 72 hours. For the SP method, the inoculum was obtained from a 3-day fungal culture, seeded in the center of a SDA plate and placed over a SDA plate which had been inoculated with 0.2 ml of B. subtilis suspension. The two plates were sealed together and incubated for 7 days, either at room temperature or at 30 °C. With the PD method, a 20-mm diameter halo was observed after 72 h of incubation and the SP method showed 25% of fungal inhibition at both temperatures assayed. The results obtained with either method suggest the presence of metabolites from the bacterium that effectively inhibit the growth of C. carrionii. Although a single strain of C. carrionii was used here, these preliminary results provide grounds for further work to confirm the antifungal potential of B. subtilis against agents of chromoblastomycosis or to further characterize the chemical nature of the inhibitory substances involved.

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Résumé

L'activité antifongique de Bacillus subtilis est évaluée vis-à-vis d'une souche de Cladophialophora carrionii par des méthodes de diffusion en gélose et d'apposition. Pour la méthode par diffusion en gélose, l'inoculum est obtenu par homogénéisation d'une culture du champignon en phase logarithmique de croissance, ajusté à 0,5 Mc-Farland et déposé (0,5 ml) sur milieu de Sabouraud dextrose agar (SDA). L'extrait de B. subtilis, préparé à partir d'une culture de huit jours dont le surnageant a été lyophilisé et concentré dix fois, est déposé (40 μl) dans des trous de 4 mm de diamètre préalablement percés dans la gélose SDA. Les boîtes sont ensuite incubées à 30 °C pendant 72 heures. Pour la méthode par apposition, l'inoculum de C. Carrionii, obtenu à partir d'une culture de trois jours et préparé comme précédemment, est déposé au centre d'une boîte de SDA ; cette dernière est placée au-dessus d'une boîte de SDA ensemencée par une suspension de 0,2 ml de B. subtilis. Les deux boîtes sont scellées ensemble et incubées pendant sept jours, soit à température ordinaire, soit à 30 °C. Aux deux températures testées, on obtient une zone d'inhibition de 20 mm après 72 heures d'incubation pour la méthode de diffusion en gélose et 25 % d'inhibition de la croissance fongique pour la méthode d'apposition. Les résultats obtenus, quelle que soit la méthode utilisée, suggèrent la présence de métabolites d'origine bactérienne capables d'inhiber la croissance de C. carrionii. Bien qu'une seule souche de C. Carrionii ait été utilisée, ces résultats préliminaires fournissent la base de travaux ultérieurs visant à confirmer le potentiel antifongique de B. subtilis contre les agents responsables de la chromoblastomycose et à caractériser la nature des métabolites inhibiteurs impliqués.

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Keywords : Cladophialophora carrionii, Bacillus subtilis, Chromoblastomycosis, Antifungal drugs, Susceptibility testing

Mots clés : Cladophialophora carrionii, Bacillus subtilis, Chromoblastomycose, Antifongiques, Tests de sensibilité


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Vol 16 - N° 2

P. 92-94 - juin 2006 Regresar al número
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