Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification (MLPA) et sondes « à façon » entièrement synthétiques. Guide pratique, recommandations et expérience au CHU de Grenoble - 07/06/12
Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification (MLPA) and custom made probes. Guidelines, recommendations and experience at the University Hospital of Grenoble
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Résumé |
La Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification (MLPA) est une technique robuste de quantification génique basée sur la ligation et l’amplification d’oligonucléotides. Sa fiabilité et son efficacité ont été largement éprouvées et ne sont aujourd’hui plus à démontrer. Outre les kits commerciaux distribués par la société titulaire du brevet, MRC-Holland™, il est possible de concevoir des sondes MLPA « à façon » entièrement synthétiques afin de répondre à une utilisation ciblée de la MLPA. Cette stratégie a permis d’ouvrir le champ de la MLPA à des applications variées allant du diagnostic de pathologies les plus rares aux vérifications d’anomalies détectées en CGH-array. Elle peut s’avérer toutefois délicate à mettre au point sans expérience. Nous détaillons ici les grandes lignes directrices et les recommandations pour la modélisation des sondes MLPA « maison » et illustrons leur utilisation dans notre laboratoire.
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Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification (MLPA) is a powerful technique for gene dosage quantification. This technique is based on the ligation followed by PCR amplification of two adjacently hybridising oligonucleotides. Its reliability and effectiveness have been proven and is now well established. Besides the commercial kits are distributed by the patentee, MRC-Holland™, it makes it possible to utilise custom-designed MLPA probes for a targeted use of this technique. This strategy has opened the field of MLPA for various applications ranging from diagnostic of rarest pathologies to confirmation of a CGH-detected abnormalities. However, it may be difficult to develop without a solid experience. Here, we detail the guidelines and recommendations for designing custom MLPA probes and illustrate their use in our laboratory.
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Vol 33 - N° 3
P. 227-235 - juin 2012 Regresar al númeroBienvenido a EM-consulte, la referencia de los profesionales de la salud.
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